口蹄疫疫苗新型复合多糖佐剂的研究

发布时间：2020-11-11 06:51

　　 佐剂(adjuvant)是疫苗中的重要有效成分,能提高抗原的免疫原性,从不同途径促进免疫,在减少抗原使用的同时达到预期的免疫保护效果。现今为止,兽用疫苗常用佐剂主要为油佐剂、铝盐佐剂等,接种含此类佐剂的疫苗后表现出毒性大、作用方式单一和佐剂成分不能代谢等缺点,从而导致接种疫苗的动物产生不良应或不能达到预期保护效果。本研究主要目的是寻求低毒、高效的天然免疫佐剂。选择黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)、人参多糖(Ginseng polysaccharide,GPS)、桑黄多糖(Mulberry polysaccharide,MPS)、香菇多糖(Lentinan,LNT)、木鳖子多糖(Hibiscus polysaccharide,HPS)、茯苓多糖(LBPS)、云芝多糖(Yunzhi polysaccharide,YPS)七种作为研究对象。通过提纯,理化性质检测,安全性评价免疫接种剂量的确定,免疫调节作用的比较后,筛选出效果较好的APS、GPS、LBPS和YPS。优化四种多糖的比例后复合成多糖配方(Complex polysaccharides,CPS),探究CPS作为佐剂的可行性。七种多糖通过酶解、萃取、冻干等工艺提纯,提纯后的多糖在Balb/c小鼠模型中探究最佳免疫剂量并进行安全性评价,结果表明:提纯后七种多糖的总糖含量分别为:APS 94.1%、GPS 83.5%、MPS 91.4%、HPS 88.9%、LBPS 78.5%、YPS 81.1%、LNT 92.6%,最佳免疫剂量分别为APS 250μg/mL、GPS 375μg/mL、MPS 750μg/mL、HPS 125μg/mL、LBPS 125μg/mL、YPS 500μg/mL、LNT 500μg/mL。其中HPS因含有木鳖子皂苷在注射剂量超过2.5 mg/Kg时对注射部位表现出毒性作,其余各组均无毒性。在小鼠模型上以特异性抗体水平评价体液免疫,以分泌的IFN-γ和IL-12等细胞因子评价细胞免疫探究各种多糖对猪O型口蹄疫OS/99毒株灭活纯化抗原的免疫调节作用。结果,同剂量二免后,含有LBPS、GPS、LNT、APS、YPS比MPS和LNT组的抗体水平高,与抗原稀释液的阴性对照相比效果更佳,且差异显著(p0.05)。根据小鼠血清中细胞因子模式,提示APS既能促进体液免疫又增进细胞免疫,LBPS、YPS促促进细胞免疫反应,GPS、HPS、MPS促进体液免疫。在剔除作用较弱的MPS和LNT以及细胞毒性较强的HPS后,以动物实验(猪模型)筛选复合多糖配方。低中高剂量三个水平复合多糖经免疫动物并较免疫效果,确定较佳配方为中剂量组,又通过单因素实验优化配方中四种多糖组分的含量,得到CPS,CPS多糖总含量为32.5 g/L,其中含APS 7.5 g/L、GPS 11.25 g/L、LBPS 3.75 g/L、YPS 10 g/L,为了保证多糖溶解更彻底,添加0.5%的非离子表面活性剂吐温80促溶,添加0.05%卡波姆971P增加佐剂黏度,此复合多糖佐剂既具有延缓吸收又能促进不溶性添加物永久性悬浮,从而增加了疫苗的稳定性。CPS作为免疫佐剂配制FMDV灭活疫苗,用ISA206和ISA50V作为对照,二免疫动物后测定血清抗体效价。结果表明CPS组的血清抗体效价均达到免疫保护的效价要求,与ISA206无显著差异(P0.05),细胞因子模式分析结果表明该佐剂既促进体液免疫,又能促进细胞免疫,细胞免疫效果显著高于两组阳性对照,且差异显著(P0.05)。CPS作为免疫增强剂稀释抗原,与ISA206、ISA50V乳化配苗,动物免疫结果表明,CPS作为免疫增强剂能弥补油佐剂促进细胞免疫反应能力弱的缺陷。CPS作为口蹄疫灭活疫苗免疫佐剂和免疫增强剂具有一定推广价值。
【学位单位】：西北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S859.797
【部分图文】：

LBPS.LBPS 注射剂量与 3 种细胞因子总体上呈现效量关系，由图 3-5 可知，LBPS 在注射剂量为 125 μg/mL，不同时间段血清中 IL-4、IFN-γ 和 TNF-α 含最高。LBPS 的最佳注射剂量为 125 μg/mL。（6）MPS 最佳注射剂量

3-8. 注射 HPS 后注射部位观察（50. Observation of injection site after HPS 图 3-9.注射 HPS 小鼠皮下组织解剖观ion of subcutaneous tissue anatomy of m 1000μg/mL 时，给药 5d 后开始出现精神面貌不佳，14 d 时皮下组织坏死组织大面积坏死如图 3-9 ，肝脏肿大射部位大面积坏死，小鼠精神沉郁，，剖解症状与上相似；500μg/mL 给药

图 3-9.注射 HPS 小鼠皮下组织解剖观tion of subcutaneous tissue anatomy of m 1000μg/mL 时，给药 5d 后开始出现精神面貌不佳，14 d 时皮下组织坏死组织大面积坏死如图 3-9 ，肝脏肿大注射部位大面积坏死，小鼠精神沉郁，，剖解症状与上相似；500μg/mL 给药部坏死，如图：3-8 所示，实验组小鼠积占皮下组织 1/5，剖检发现小鼠肝脏L 注射 HPS，给药后 5d 注射部位轻皮迹象；62.5μg/mL 注射后，不出现坏死器，无黄疸等特征。个水平组均无死亡，饮水增加（注射，饮食正常，活动增加（表现为爬笼时均正常。
【参考文献】

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本文编号：2878888