绵羊胎盘绒毛膜滋养层多核细胞形成机理的初探

发布时间：2020-11-14 09:34

　　 哺乳动物的胎盘是由胚胎滋养层细胞和母体的子宫内膜细胞组成的,绵羊胎盘滋养层细胞可以侵入到母体子宫内膜组织中进行营养、气体和激素的物质交换。在孕体植入过程中涉及到孕体滋养层对合、附着和粘附到子宫内膜腔上皮细胞(endometrial luminal epithelial cells,ELECs)上。在孕体外胚层内的是绒毛膜,其中的双核滋养层细胞,又被称为滋养层巨型双核细胞(trophoblast giant binucleate cells,TBCs)。有研究表明,TBCs与ELECs发生融合形成三个细胞核的多核细胞,TBCs再次与三个核的滋养层细胞发生融合,形成多核合胞体,最终形成胎盘。目前没有关于多核细胞的形成与ELECs相关联的研究报道。本研究探讨的关键问题是在多核细胞形成中是否受到ELECs的调控以及在ELECs的参与下是否促进多核细胞的形成。并以原代绵羊胎盘绒毛膜滋养层细胞(sheep trophoblast cells,STCs)和ELECs的共培养体系为研究对象,通过添加不同浓度的雌二醇(17β-Estrodiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)以研究其对绵羊绒毛膜滋养层多核细胞形成的影响,为探究绵羊胎盘的生长发育提供试验依据。为了探讨绒毛膜滋养层多核细胞的形成机制,本研究通过酶消化法分离培养原代STCs和ELECs,结果表明,倒置相差显微镜下STCs形态呈多角形,片状铺展生长,ELECs形态呈鹅卵石样,呈铺路石状生长;采用免疫荧光技术分别对两种细胞进行鉴定,结果表明,原代STCs角蛋白CK-7表达呈阳性,原代ELECs角蛋白CK-18表达呈阳性;将两种细胞共培养,并观察多核细胞的数量和形态,分析不同数量的ELECs对多核细胞数量的影响,并设立时间梯度,摸索出最佳的共培养条件,结果表明,当绒毛膜滋养层细胞与子宫内膜腔上皮细胞数量(STCs与ELECs)比值为2:1,培养时间48 h时,绵羊滋养层多核细胞的数量最多,且结果具有显著性意义(p0.05);瞬时转染空质粒pEGFP-Cl到ELECs中,并添加原代STCs,在最佳共培养条件下进行培养,利用CK-7标记并且采用激光共聚焦显微镜观察多核细胞的形态。结果表明,绒毛膜滋养层多核细胞角蛋白CK-7表达呈阳性,呈现特异的红色,且在细胞质中有pEGFP-Cl特异的绿色荧光,证明了在多核细胞中也表达了转染空质粒pEGFP-Cl ELECs的特异性荧光蛋白,说明ELECs参与了绒毛膜滋养层多核细胞的形成;分别采用E2和P4共同使用对共培养细胞进行刺激,观察多核滋养层细胞的数量,结果表明,E2的参与增加了多核滋养层细胞的数量,而P4的参与则减少了多核滋养层细胞的数量,联合使用组的结果显示,E2的加入相对于对照组引起绵羊滋养层多核细胞数量的增加,而P4的加入相对于对照组则不同程度的引起滋养层多核细胞数量的减少,其结果与E2和P4单独刺激的结果相一致。本研究证实了多核细胞的形成与 ELECs的参与有密切的关系,而且不同的激素环境对于绒毛膜滋养层多核细胞的数量均有影响,为今后探究多核细胞的形成机制奠定了实验基础。
【学位单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S826
【部分图文】：

插图和附表清单??１．?图１－１?子宫解剖结构的比较?１??２．?图１－２?不同物种胎盘的大体形态?２??３．?图１－３不同合胞素及哺乳动物胎盘结构的多样性?３??４．?图１－４人胎盘屏障的微生理模型?４??５．?图１－５?合胞体细

绵羊的胎盘结构属于子叶型胎盘，从微观组织学结构上属于结缔组织绒毛膜胎??盘，其最大的特点是在形成过程中包含有大约１００多个由滋养外胚层绒毛细胞和子??宫肉阜组成的胎盘瘤（见图１－２）?ｗ。但是，其中一些滋养外胚层细胞产生了分化，??形成两个细胞核的滋养层细胞，它们称为巨细胞或双核滋养层细胞（ＴＢＣｓ），同时??它们在妊娠期的不同阶段与子宫内膜细胞融合［９］。合胞体由子宫上皮细胞与ＴＢＣｓ相??互融合产生杂交细胞团，是哺乳动物中的特有的结构，其包含了母体细胞核和胚胎??来源的细胞核。合胞体（多核细胞团）在母体子宫内膜组织中大量存在，而在内皮??绒膜胎盘和血绒膜胎盘却没有相同的现象。从功能的角度来看，合胞体能够将激素??和滋养层细胞蛋白转移到母体循环中，妊娠相关糖蛋白可以在母体血清中检测到，??并可以作为诊断的依据。??Ｄｉｆｆｕｓｅ?Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙ??｛ｅ．ｇ．?Ｈｏｒｓｅ，?Ｐｉｇ）?（ｅ．ｇ．?Ｃｏｗ，?Ｓｈｅｅｐ）??Ｚｏｎａｒｙ?Ｄｉｓｃｏｉｄａｌ??｛ｅ．ｇ．?Ｃａｔ

因为在其发育过程中，频繁的发现许多胎盘发育的必须基因都是由ＥＲＶｓ衍生??的启动子来转录的［１４］。另外一些研究者认为，ＥＲＶｓ基因己经成为宿主的一部分。而??在灵长类，兔形类，啮齿类动物中同样发现（见图１－３），该宿主体内ＥＲＶｓ编码的??囊膜蛋白促进了滋养层细胞之间的融合，在母胎界面形成了合胞体层［１５］。??ｍｏｔｈｅｒ?ｆｅｔｕｓ??Ｉ?一＾一?ｌａｇｏｍｏｒｐｈａ?麵?一??出?１?——Ｒｏｄｅｎｔｉａ?靈?ｓｙｎｃｙｕ’ｎ￣Ａ（ｍｄ＿８?—？?ＨＶ０ｆ？?ｈｅｍｏｃｈｏｒｉａｌ??．．?Ｐｒｉ＿?■—」１?；Ｓｙｎｃｙｔｉ〇ｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ??ｒ?Ｃａｒｎｉｖｏｒａ?讕—１?ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｃｈｏｒｉａｌ???一?Ｐｅｒｉｓｓｏｄａｃｔｙｌａ?Ｓ??一＾＾??Ｃｈｉｒｏｐｔｅｒａ?驪＿?ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ?ｔｒｉｎｕｃｌｅａｔｅ?ｃｅｌｌ??Ｅｕｔｈｅｒｉａｎ?（＿?ＭＭ＿?Ｒｕｍｉｎａｎｔｉａ?ｓｙｎｃｖｔｉｎ？?ｓｙｎｅｐｉｔｈｅｌｉｏｃｈｏｒｉａｌ??—ｌ［ｒ＾＿?Ｃｅｔａｃｅａ?ａ?丨霤團？丨（ｒ—）??Ｉ?——Ｓｕｉｎａ?麗??—－?Ｉｎｓｅｃｔｉｖｏ丨ａ?ｈｉ?國，：．：ｊ?Ｉ?．＇纏＾??，?、?１?ｅｐｉｔｈｅｌｉｏｃｈｏｒｉａｌ??」——?Ａｆｒｏｔｈｅｒｉａ?誦＿?丨，。▼???－?Ｘｅｎａｆｔｈｒａ?國?１．?ｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌ??ｕｔｅｒｉｎｅ?ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ?ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ??ｆ■…Ｔ…，．？，，，，，?““广—
【参考文献】

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本文编号：2883327