新型鸭呼肠孤病毒基因组序列解析及其对雏鸭致病性差异的病理学研究

发布时间：2020-11-15 13:34

　　本实验采用细胞培养、光镜、RT-PCR、基因扩增和测序、动物感染模型构建、组织病理学、免疫组化等多种研究方法,在BHK-21细胞系中增殖本实验室分离得到新型鸭源性呼肠孤病毒分离株(Novel Duck Reovirus,NDRV)JZ061214株、HP080421株、HP081122株、HP09318株和YM101120株,挑选其中一株NDRV HP080421株,进行全基因组测序及分析,接着对5株毒株的S1基因扩增及序列测定和分析,以及挑选这5株毒株中遗传差异较大的3株感染樱桃谷雏鸭,研究对雏鸭致病性的差异。1.HP080421株全基因组测序及分析得到全基因组序列(23419bp),有10个节段,各个节段的同源性最高的均为NDRV,与NDRV SD-12株和091株的亲缘关系最近。2.5株NDRV的S1基因扩增及序列测定和分析扩增出了约1586bp的节段,5株毒株S1基因的核苷酸序列与NDRV的同源性均在90%以上,而5株DRV与MDRV和ARV同源性分别为35.0%-37.4%和43.2%-45.3%。分析S1基因的进化树,JZ061214株与NDRV SD-12株亲缘关系最近,与HP09318株,HP081122株,HP080421株和YM101120存在一定的遗传距离。3.3株NDRV对樱桃谷雏鸭致病性差异研究NDRV JZ061214株、HP09318株和YM101120株感染7d樱桃谷鸭,部分鸭眼角出现泪痕,剖检病变类似,表现为脾肿大,脾表面可见大小不一的黄白色病灶;JZ061214组病变最为严重,YM101120组感染后5d和7d,黄、白斑点消失。组织病理学观察,脾表现为出现不同程度的细胞坏死;法氏囊病变表现为淋巴滤泡和淋巴滤泡内的淋巴细胞减少;胸腺表现为胸腺小体周围出现坏死灶。用免疫组织化学检测感染后组织中病毒含量,发现在感染后3d和5d,脾的病毒滴度最高,3株毒株的脾中病毒含量最高的是JZ061214株,剩余两种病毒含量接近。
【学位单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.32
【部分图文】：

电泳图,呼肠孤病毒,电泳图,毒株

图 11 5 株新型鸭呼肠孤病毒 S1 基因扩增电泳图 maker；1，2，3，4 和 5 分别是感染组 HP09318，HP080421，HP081122，和 JZ061214 病毒株 S1 基因扩增结果；6：阴性对照。Fig.11 Amplification of S1 gene from five novel duck reovirus strains maker；1,2,3,4,5：Amplification products of S1 gene in infected group of HHP080421，HP081122，YM101120 and JZ061214;6:the control group.因序列的分析基因同源性比较年研究发现呼肠孤病毒基因组中 S1基因的变异程度最高，为了明毒 HP09318株，HP080421株，HP081122株，YM101120株和 JZ06源呼肠孤病毒同源性的关系，本研究选取了 MDRV 毒株（ZJ20）、ARV 毒株（138株和 S1133株）、NDRV 毒株（SD-12株和

眼周,雏鸭

新型鸭呼肠孤病毒基因组序列解析及其对雏鸭致病性差异的病理学研究3 新型鸭呼肠孤病毒 JZ061214 株、HP09318 株和 YM101120株对雏鸭的致病性3.1 临床症状和眼观病理变化分析 NDRV HP09318 株、HP080421 株、HP081122 株、YM101120 株和 JZ061214株的 S1 基因及其编码的蛋白σC 基因的核苷酸序列的遗传进化树，与其他报道的NDRV TH11 株，SD-12 株等处于同一进化分支，并根据这 5 株病毒的σC 蛋白基因核苷酸序列的遗传进化树亲缘性远近，挑选了其中差异较大 NDRV JZ061214 株、HP09318 株和 YM101120 株感染雏鸭，研究它们对雏鸭的致病性。结果发现，整个动物感染实验期间，无雏鸭自然死亡，感染组雏鸭只显出短暂的疲态和食欲不振，除此之外，部分鸭眼角出现泪痕，其余外观未出现明显异常，如图 14，图 15 所示。

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