钼镉联合染毒对鸭原代肾小管上皮细胞凋亡的影响

发布时间：2020-11-16 10:06

　　 为了探究钼镉联合染毒对鸭原代肾小管上皮细胞凋亡的影响,本研究选取10-15日龄雏鸭,通过筛网过滤法和酶消化法建立鸭肾小管上皮细胞体外培养模型。硫酸镉(3CdSO_4·8H_2O)和钼酸铵((NH_4)_6Mo_7O_(24)·4H_2O)作为毒源。试验分为Control组(0μmol/L Cd+0μmol/L Mo)、LCd组(2.5μmol/L Cd)、HCd组(5μmol/L Cd)、LMo组(480μmol/L Mo)、HMo组(960μmol/L Mo)、LMoCd组(2.5μmol/L Cd+480μmol/L Mo)、HMoCd组(5μmol/L Cd+960μmol/L Mo),将钼和镉添加到无血清培养基中,染毒12 h后,分别用紫外分光光度计法测定鸭肾小管上皮细胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性,流式细胞法测定细胞凋亡率、细胞内钙离子水平、细胞活性氧水平、细胞内pH变化、细胞线粒体膜电位变化及荧光定量PCR法测定相关凋亡基因Bcl-2、Bak-1和Caspase-3的mRNA表达变化量;此外,通过吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色法观察细胞凋亡情况。结果如下:1.各染毒组细胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性均极显著(P0.01)低于Control组,且钼镉联合组细胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性均显著或极显著(P0.05或P0.01)低于相对应的钼镉单独染毒组。2.各染毒组细胞凋亡率、细胞内钙离子水平、细胞活性氧水平均极显著(P0.01)高于Control组,且钼镉联合组细胞凋亡率、细胞内钙离子水平、细胞活性氧水平均显著或极显著(P0.05或P0.01)高于相对应的钼镉单独染毒组;细胞内pH、细胞线粒体膜电位均极显著(P0.01)低于Control组,且钼镉联合组细胞内pH、细胞线粒体膜电位均显著或极显著(P0.05或P0.01)低于相对应的钼镉单独染毒组。3.各染毒组的Bcl-2 mRNA表达量均极显著低于Control组(P0.01),Bak-1和Caspase-3 mRNA表达量均极显著高于Control组(P0.01)。联合染毒组的Bcl-2mRNA表达量极显著低于相应单独染毒组,Bak-1和Caspase-3的mRNA表达量则极显著(P0.01)高于相应单独染毒组。4.吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色显示各染毒组均出现凋亡细胞,联合染毒组的细胞凋亡数均多于相应的单独染毒组。结论:钼镉染毒导致鸭肾小管上皮细胞内活性氧水平和钙离子浓度升高,细胞膜ATPase活性、细胞pH和线粒体膜电位降低,Bcl-2 mRNA表达下调,Bak-1、Caspase-3mRNA表达上调;由此可知,钼镉通过氧化应激介导的细胞凋亡途径诱导鸭肾小管上皮细胞凋亡;钼、镉对鸭肾小管上皮细胞的毒性具有剂量-效应关系,且钼镉之间呈协同作用。
【学位单位】：江西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S859.8
【部分图文】：

20图 6 钼镉染毒 12 h 对鸭肾小管上皮细胞线粒体膜电位的影响Fig 6 Effect of Mo and Cd on mitochondrial membrane potential in renal tubular epithelial cells3.6 钼镉染毒 12 h 对鸭肾小管上皮细胞凋亡的影响3.6.1 钼镉染毒 12 h 对鸭肾小管上皮细胞凋亡率的影响如图 7 所示，与对照组比较，各攻毒组的细胞凋亡率均极显著上升（P<0.01）；与 LMo 组比较，HMo 组、LMoCd 组和 HMoCd 组的细胞凋亡率均极显著上升（P<0.01）；与 HMo 组比较，HMoCd 组的细胞凋亡率极显著上升（P<0.01）；与LCd 组比较，HCd 组、LMoCd 组和 HMoCd 组的细胞凋亡率均极显著上升（P<0.01）；与 HCd 组比较，HMoCd 组的细胞凋亡率极显著上升（P<0.01）；与 LMoCd 组比较，HMoCd 组的细胞凋亡率极显著上升（P<0.01）。

钼镉联合染毒对鸭原代肾小管上皮细胞凋亡的影响3.6.2 吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）染色结果如图 8 所示，对照组细胞 AO/EB 染色基本为绿色，细胞存活率高、凋亡率低；各染毒组均见有凋亡细胞，细胞染为黄色、橙色或红色；随着染毒剂量的提高，凋亡细胞数也随之增多；联合染毒组的细胞凋亡数比单独染毒组的多。
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本文编号：2886013