棕榈酸、β-羟丁酸诱导氧化应激对牛子宫内膜细胞NF-κB信号通路影响的研究

发布时间：2020-11-18 04:03

　　 [背景]棕榈酸(PA)和β-羟丁酸(BHBA)是一些代谢性疾病中炎症反应的重要诱导因子。PA作为非酯化脂肪酸(NEFA)中含量最高的饱和脂肪酸,跟BHBA一样,在酮病牛血液中具有较高的浓度。高酮血症和高游离脂肪酸血症与围产期奶牛炎症性疾病(如乳腺炎和子宫内膜炎)的发展密切相关。[目的]本研究的目的是探讨高水平的PA和BHBA是否可以激活氧化应激介导的NF-κB信号通路以促进牛子宫内膜细胞(BEND)中炎性因子的合成。为了解围产期奶牛营养代谢性疾病与炎性疾病之间的关系提供理论依据。[方法]在本研究中,利用氧化指标测定试剂盒、酶联免疫吸附试验(ELIS A)、荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测了不同浓度的PA和BHBA作用下BEND细胞的氧化状态,以及在添加N-乙酰半胱氨酸(NAC,抗氧化剂)和二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC,NF-κB信号通路抑制剂)后,各处理组中炎性因子的表达和NF-κB信号通路的激活情况。[结果]用较高浓度的PA和BHBA分别作用于体外培养的BEND细胞,发现细胞中丙二醛(MDA)的含量显著增加,谷胱甘肽(GSH)的含量减少,细胞中抗氧化系统的活性降低,包括谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)。同时,PA和B HBA诱导的氧化应激激活了NF-κB信号通路,上调了促炎因子的释放。但是,当分别同时加入PDTC和NAC时,PA和BHBA对NF-κB信号通路的激活作用和对炎症反应的促进作用被显著抑制。[结论]高浓度的棕榈酸和β-羟丁酸可诱导BEND细胞发生氧化应激,激活NF-κB信号通路,促进炎性细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α表达,导致牛子宫内膜细胞发生炎性损伤。
【学位单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S858.23
【部分图文】：

图 2-1 细胞分离培养 0h(10×40) 图 2-2 细胞分离培养 12h(10×40)Fig.2-1After passage 0h Fig.2-2 After passage 12h图 2-3 细胞分离培养 24h(10×40) 图 2-4 细胞分离培养 48h(10×40)Fig.2-3 After passage 24h Fig.2-4 After passage 48h2.3.2 不同浓度的 PA 作用不同时间对 BEND 细胞活力影响的检测结果如图 2-5 所示，不同浓度的 PA 作用于 BEND 细胞，并比较了 PA 作用不同时间对细胞活力的影响。由图可知，随着作用时间的增加，不同浓度的 PA 组间差异逐渐显著，并且发现 PA 对 BEND 细胞活力的影响具有浓度依赖性。当作用

图 2-1 细胞分离培养 0h(10×40) 图 2-2 细胞分离培养 12h(10×40)Fig.2-1After passage 0h Fig.2-2 After passage 12h图 2-3 细胞分离培养 24h(10×40) 图 2-4 细胞分离培养 48h(10×40)Fig.2-3 After passage 24h Fig.2-4 After passage 48h2.3.2 不同浓度的 PA 作用不同时间对 BEND 细胞活力影响的检测结果如图 2-5 所示，不同浓度的 PA 作用于 BEND 细胞，并比较了 PA 作用不同时间对细胞活力的影响。由图可知，随着作用时间的增加，不同浓度的 PA 组间差异逐渐显著，并且发现 PA 对 BEND 细胞活力的影响具有浓度依赖性。当作用

图 2-3 细胞分离培养 24h(10×40) 图 2-4 细胞分离培养 48h(10×40)Fig.2-3 After passage 24h Fig.2-4 After passage 48h2.3.2 不同浓度的 PA 作用不同时间对 BEND 细胞活力影响的检测结果如图 2-5 所示，不同浓度的 PA 作用于 BEND 细胞，并比较了 PA 作用不同时间对细胞活力的影响。由图可知，随着作用时间的增加，不同浓度的 PA 组间差异逐渐显著，并且发现 PA 对 BEND 细胞活力的影响具有浓度依赖性。当作用时间为 24 h 时，组间差异开始明显，所以综合不同浓度 PA 组间细胞活力下降的显著性和 BEND 细胞生长周期等因素，我们筛选出 24 h 为后续试验的最佳 PA作用时间。观察在 24 h 时细胞活力状态，我们发现当 PA 浓度为 0.1~0.3 mmol/L时细胞活力下降不显著，当 PA 浓度为 0.4 mmol/L 时细胞活力下降显著，当 PA浓度为 0.6 mmol/L 时细胞活力下降极显著。所以，我们选择 0.2 mmol/L、0.4mmol/L(P<0.05)、0.6 mmol/L(P<0.01)这三个具有代表性的 PA 浓度进行后续的细胞氧化状态测定试验。
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本文编号：2888305