钙离子介导的卵母细胞冻融性损伤的初步研究

发布时间：2020-12-14 05:34

　　卵母细胞冷冻复苏后的复苏率、受精率、胚胎发育率和成活率一直不理想,导致这种现象的原因比较复杂,其中胞内钙离子浓度的升高可能是发育率降低的一个重要原因。为了探究细胞内钙离子的改变对卵母细胞造成的影响,本研究通过透射电子显微镜、激光扫描共聚焦显微镜等对冷冻前后各组卵母细胞的超微结构、精子穿透、透明带消化、发育率以及钙离子浓度和波动进行研究。结果发现:（1）透射电子显微镜下,新鲜对照组、毒胡萝卜素（Thapsigargin,TG）处理组、2-氨基乙氧基苯硼酸（2-Aminoethoxydiphenylborate,2-APB）处理组卵母细胞的透明带和线粒体结构都比较完整;而冷冻组、TG冷冻组卵母细胞的冷冻损伤较严重,透明带变宽,边缘处破损,卵周隙变宽,线粒体结构模糊不清;2-APB冷冻组卵母细胞损伤较轻,透明带和线粒体等细胞器结构只有部分出现模糊。（2）透明带消化时间和透明带结合精子个数:2-APB冷冻组（230.5±7.14,4.17±1.11）、TG 冷冻组（172.5±5.91,1.17± 1.03）、冷冻组（221.22±9.46,2.75±1.29）与新鲜对照组（300.14±7.... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１冷冻液Ｉ丨刺激后各组钙离子波动??ＦＩＧ．?２－１?Ｃａｌｃｉｕｍ?ｉｏｎ?ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ?ｌｉｑｕｉ?

将各组卵母细胞细胞进行ＩＶＦ，１６ｈ后挑选出存活良好的细胞用乙酸：乙醇（１：?３）??的溶液固定４８ｈ，４°Ｃ，取出固定好的细胞，用１％?（ｗ／ｖ）?ｏｒｃｅｉｎ染液染色５ｍｉｎ，压片??拍照观察（如图３－１所示）。??ｔ??／?＼??Ｉ?１??ｉ?Ｊ??图３－１卵母细胞结合精子个数??ＦＩＧ．?３－１?Ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｏｏｃｙｔｅｓ?ｔｈａｔ?ｂｉｎｄ?ｔｏ?ｓｐｅｒｍ??表３－２胞内钥离子浓度的改变对玻璃化冷冻卵母细胞结合精子个数的影响??Ｔａｂｌｅ?３－２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｖｉｔｒｅｏｕｓ?ｆｒｏｚｅｎ???ｏｏｃｙｔｅ?ｃｏｍｂｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?ｓｐｅｒｍ?ｃｏｕｎｔ．??组别?细胞个数?结合精子??Ｇｒｏｕｐｓ?Ｃｅｌｌ?Ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍ??新鲜对照组?Ｆｒｅｓｈ?ｃｏｎｔｒｏ丨?ｇｒｏｕｐ?＾?８．００±２．４５??ＴＧ?处理组?Ｔｏｘｉｃｉｔｙ?ｏｆ?ＴＧ?ｇｒｏｕｐ?１５?７．３３±２．１３队??２－ＡＰＢ?处埋组?Ｔｏｘｉｃｉｔｙ?ｏｆ?２－ＡＰＢ?ｇｒｏｕｐ?１５?８．７３±２．３４ａｄ??冷冻组?Ｆｒｏｚｅｎ?ｇｒｏｕｐ?１２?２＿７５±?Ｉ?＇２９ｂ??ＴＧ?冷冻组?ｆｒｏｚｅｎ?ｇｒｏｕｐ?ｏｆ?ＴＧ?丨２?Ｉ．１７±１．０３??２－ＡＰＢ?冷冻组?ｆｒｏｚｅｎ?ｇｒｏｕｐ?ｏｆ?２－ＡＰＢ?１２?４Ｊ７±Ｌ１１＇??注：同列字母不同字母为差异显著（Ｐ＜０．０５）

图４－１卵母细胞体外培养发育不同时期图??ＦＩＧ．?４－１?Ｔｈｅ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｏｆ?ｏｏｃｙｔｅ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅｓ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??


本文编号：2915912