裂解牛源大肠杆菌、链球菌的噬菌体分离鉴定及初步应用
发布时间：2020-12-14 23:35
奶牛子宫内膜炎是引起奶牛不孕的一个重要原因,是奶牛养殖中的常见疾病,同时还会造成奶牛泌乳量的大幅减少,降低养殖效益,严重制约了奶牛业的发展。随着抗生素的不合理使用,出现了很多耐药菌株,使得由细菌感染引起的奶牛子宫内膜炎的治疗遇到了前所未有的困难。作为细菌的原始杀手,噬菌体再一次引起了人们的关注。本研究利用实验室保存的来源于奶牛子宫内膜炎的大肠杆菌和链球菌作为宿主菌,采用双层平板法从污水中分离纯化到大肠杆菌毒性噬菌体EP-CE和链球菌毒性噬菌体SP48,鉴定了两株噬菌体的核酸类型,并进行了生物学特性和初步应用研究。结果表明,本研究中分离到的噬菌体EP-CE和噬菌体SP48具有很强的特异性,对乙醚和氯仿均不敏感。两者都是双股DNA病毒,EP-CE的基因组大于50kb,SP48的基因组大于61 kb。透射电镜观察噬菌体EP-CE属于肌尾病毒科,头部呈二十面体对称结构,头部长约70.9±0.35nm、宽约68.4±0.48 nm,尾部长约90.1±5.39 nm;噬菌体SP48属于长尾病毒科,头部呈二十面体对称结构,头部长约79.0±0.33 nm、宽约73±0.38 nm,尾部长约354±0...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
噬菌体SP48点滴法验证Fig.1.3SpottestsofphageSP48intheliquid
链球菌毒性噬菌体的点滴法验证如图 1.3。通过多次挑取单个噬菌斑，然后层平板法对链球菌毒性噬菌体进行反复纯化，使得噬菌斑较大、单一均匀、整齐、清晰透亮，如图 1.4 所示，噬菌斑的直径大约为 0.8 mm，命名为 SP48。图 1.1 噬菌体 EP-CE 点滴法验证Fig. 1.1 Spot tests of phage EP-CE in theliquid samples.注：链：拟含大肠杆菌噬菌体的原液 D：对照组图 1.2 噬菌体 EP-CE 纯化后的噬菌斑Fig. 1.2 The plaques of phage EP-CEafter purification.
结果 噬菌体的分离纯化将污水和宿主菌混合培养，多次富集后，通过点滴法验证，结果显示成功了大肠杆菌毒性噬菌体和链球菌毒性噬菌体。大肠杆菌毒性噬菌体点滴法图 1.1 所示：拟含噬菌体的地方出现了无菌区，对照组区域有细菌生长，功分离到了大肠杆菌毒性噬菌体。通过多次挑取单个噬菌斑，然后用双层对大肠杆菌毒性噬菌体进行反复纯化，使得噬菌斑较大、单一均匀、边缘清晰透亮，如图 1.2 所示，噬菌斑的直径大约为 1.5 mm，命名为 EP-CE
【参考文献】：
期刊论文
[1]大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性分析[J]. 王海磊,陈景超,鲁欣欣. 河南师范大学学报(自然科学版). 2019(02)
[2]1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性分析[J]. 孙利厂,周艳,张莉莉,庞茂达,何涛,包红朵,张辉,何灵尘,王冉. 中国动物传染病学报. 2018(06)
[3]繁殖青枯菌噬菌体无毒菌株的筛选及应用[J]. 林志坚,夏志辉,顾钢,周挺,胡方平,蔡学清. 中国生物防治学报. 2018(06)
[4]一株空肠弯曲菌噬菌体的分离及其生物学特性鉴定[J]. 宋召军,姜启东,范正杨,焦新安,黄金林. 中国抗生素杂志. 2018(08)
[5]噬菌体在控制细菌感染中的临床应用[J]. 李婷华,郭晓奎. 中国抗生素杂志. 2018(08)
[6]新疆奶牛子宫内膜炎大肠杆菌进化分群及耐药特性研究[J]. 马帅,乔军,孟庆玲,伍晔晖,王熙凤,郭晶,蔡扩军,王登峰,才学鹏. 河南农业科学. 2018(07)
[7]郑州市奶牛场奶牛子宫内膜炎病原菌分离和鉴定[J]. 王军,宋予震,皇甫和平,石冬梅. 中国兽医杂志. 2018(06)
[8]大肠杆菌K99噬菌体的分离鉴定及在小鼠上的防治效果[J]. 赵影,刘秀侠,李金敏,徐海燕,谷魏,刘元香,陈梅楠. 微生物学通报. 2018(05)
[9]用噬菌体破解细菌生物被膜的研究进展[J]. 渠坤丽,丛聪,王丽丽,李晓宇,袁玉玉,张美霞,徐永平. 中国抗生素杂志. 2017(10)
[10]清丰县奶牛子宫内膜炎流行学调查[J]. 马忠贤. 中国草食动物科学. 2017(05)
博士论文
[1]姜黄素对子宫内膜炎致病菌抑菌活性及抗炎机理的研究[D]. 张欣.内蒙古农业大学 2017
[2]一株大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_ECOO78的分离、鉴定和基因组学分析及其解聚酶Dpo42的作用机制[D]. 郭志敏.吉林大学 2017
[3]奶牛子宫内膜炎早期诊断及益生菌抗大肠杆菌诱导的子宫内膜上皮细胞炎性损伤作用机理[D]. 刘明超.中国农业大学 2017
[4]溶藻弧菌噬菌体特性及其防控刺参感染的研究[D]. 张建城.大连理工大学 2017
[5]内蒙古地区牛源致病链球菌的耐药性、毒力特征分析及其两者的相关性研究[D]. 丁月霞.内蒙古农业大学 2015
[6]阿魏酸钠抗炎分子机制及对奶牛子宫内膜炎疗效初步观察[D]. 刘春杰.吉林大学 2013
[7]猪链球菌2型烈性及溶原性噬菌体的分离与鉴定[D]. 马玉玲.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]香樟精油对奶牛子宫内膜炎大肠杆菌生物膜的抑制作用研究[D]. 付敬敬.河南农业大学 2018
[2]丹连花子宫灌注液治疗奶牛子宫内膜炎的临床试验[D]. 李健.西北农林科技大学 2018
[3]孕酮对大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性反应的影响机制[D]. 林家琪.扬州大学 2018
[4]大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与初步应用[D]. 廉乐乐.东北农业大学 2017
[5]黑龙江部分地区肉牛大肠杆菌耐药基因与毒力基因检测及耐药性分析[D]. 岳山.黑龙江八一农垦大学 2017
[6]猪源肠产毒性大肠杆菌及其噬菌体的分离和生物学特性研究[D]. 付丽娜.大连理工大学 2017
[7]羟基红花黄色素A对LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的干预作用及分子机制研究[D]. 蒋会会.西南大学 2017
[8]粘质沙雷菌噬菌体的分离鉴定及噬菌体疗法对粘质沙雷菌感染小鼠的疗效观察[D]. 徐花.吉林大学 2014
[9]一株猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析[D]. 杜冬冬.山东农业大学 2012
[10]豫南地区母牛子宫内膜炎发病规律及其诊治技术的研究[D]. 王子恒.河南农业大学 2010
本文编号：2917216
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
噬菌体SP48点滴法验证Fig.1.3SpottestsofphageSP48intheliquid
链球菌毒性噬菌体的点滴法验证如图 1.3。通过多次挑取单个噬菌斑，然后层平板法对链球菌毒性噬菌体进行反复纯化，使得噬菌斑较大、单一均匀、整齐、清晰透亮，如图 1.4 所示，噬菌斑的直径大约为 0.8 mm，命名为 SP48。图 1.1 噬菌体 EP-CE 点滴法验证Fig. 1.1 Spot tests of phage EP-CE in theliquid samples.注：链：拟含大肠杆菌噬菌体的原液 D：对照组图 1.2 噬菌体 EP-CE 纯化后的噬菌斑Fig. 1.2 The plaques of phage EP-CEafter purification.
结果 噬菌体的分离纯化将污水和宿主菌混合培养，多次富集后，通过点滴法验证，结果显示成功了大肠杆菌毒性噬菌体和链球菌毒性噬菌体。大肠杆菌毒性噬菌体点滴法图 1.1 所示：拟含噬菌体的地方出现了无菌区，对照组区域有细菌生长，功分离到了大肠杆菌毒性噬菌体。通过多次挑取单个噬菌斑，然后用双层对大肠杆菌毒性噬菌体进行反复纯化，使得噬菌斑较大、单一均匀、边缘清晰透亮，如图 1.2 所示，噬菌斑的直径大约为 1.5 mm，命名为 EP-CE
【参考文献】：
期刊论文
[1]大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性分析[J]. 王海磊,陈景超,鲁欣欣. 河南师范大学学报(自然科学版). 2019(02)
[2]1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性分析[J]. 孙利厂,周艳,张莉莉,庞茂达,何涛,包红朵,张辉,何灵尘,王冉. 中国动物传染病学报. 2018(06)
[3]繁殖青枯菌噬菌体无毒菌株的筛选及应用[J]. 林志坚,夏志辉,顾钢,周挺,胡方平,蔡学清. 中国生物防治学报. 2018(06)
[4]一株空肠弯曲菌噬菌体的分离及其生物学特性鉴定[J]. 宋召军,姜启东,范正杨,焦新安,黄金林. 中国抗生素杂志. 2018(08)
[5]噬菌体在控制细菌感染中的临床应用[J]. 李婷华,郭晓奎. 中国抗生素杂志. 2018(08)
[6]新疆奶牛子宫内膜炎大肠杆菌进化分群及耐药特性研究[J]. 马帅,乔军,孟庆玲,伍晔晖,王熙凤,郭晶,蔡扩军,王登峰,才学鹏. 河南农业科学. 2018(07)
[7]郑州市奶牛场奶牛子宫内膜炎病原菌分离和鉴定[J]. 王军,宋予震,皇甫和平,石冬梅. 中国兽医杂志. 2018(06)
[8]大肠杆菌K99噬菌体的分离鉴定及在小鼠上的防治效果[J]. 赵影,刘秀侠,李金敏,徐海燕,谷魏,刘元香,陈梅楠. 微生物学通报. 2018(05)
[9]用噬菌体破解细菌生物被膜的研究进展[J]. 渠坤丽,丛聪,王丽丽,李晓宇,袁玉玉,张美霞,徐永平. 中国抗生素杂志. 2017(10)
[10]清丰县奶牛子宫内膜炎流行学调查[J]. 马忠贤. 中国草食动物科学. 2017(05)
博士论文
[1]姜黄素对子宫内膜炎致病菌抑菌活性及抗炎机理的研究[D]. 张欣.内蒙古农业大学 2017
[2]一株大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_ECOO78的分离、鉴定和基因组学分析及其解聚酶Dpo42的作用机制[D]. 郭志敏.吉林大学 2017
[3]奶牛子宫内膜炎早期诊断及益生菌抗大肠杆菌诱导的子宫内膜上皮细胞炎性损伤作用机理[D]. 刘明超.中国农业大学 2017
[4]溶藻弧菌噬菌体特性及其防控刺参感染的研究[D]. 张建城.大连理工大学 2017
[5]内蒙古地区牛源致病链球菌的耐药性、毒力特征分析及其两者的相关性研究[D]. 丁月霞.内蒙古农业大学 2015
[6]阿魏酸钠抗炎分子机制及对奶牛子宫内膜炎疗效初步观察[D]. 刘春杰.吉林大学 2013
[7]猪链球菌2型烈性及溶原性噬菌体的分离与鉴定[D]. 马玉玲.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]香樟精油对奶牛子宫内膜炎大肠杆菌生物膜的抑制作用研究[D]. 付敬敬.河南农业大学 2018
[2]丹连花子宫灌注液治疗奶牛子宫内膜炎的临床试验[D]. 李健.西北农林科技大学 2018
[3]孕酮对大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性反应的影响机制[D]. 林家琪.扬州大学 2018
[4]大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与初步应用[D]. 廉乐乐.东北农业大学 2017
[5]黑龙江部分地区肉牛大肠杆菌耐药基因与毒力基因检测及耐药性分析[D]. 岳山.黑龙江八一农垦大学 2017
[6]猪源肠产毒性大肠杆菌及其噬菌体的分离和生物学特性研究[D]. 付丽娜.大连理工大学 2017
[7]羟基红花黄色素A对LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的干预作用及分子机制研究[D]. 蒋会会.西南大学 2017
[8]粘质沙雷菌噬菌体的分离鉴定及噬菌体疗法对粘质沙雷菌感染小鼠的疗效观察[D]. 徐花.吉林大学 2014
[9]一株猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析[D]. 杜冬冬.山东农业大学 2012
[10]豫南地区母牛子宫内膜炎发病规律及其诊治技术的研究[D]. 王子恒.河南农业大学 2010
本文编号：2917216
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