CRISPR/Cas9系统在鸡MSTN上的效率验证

发布时间：2020-12-15 00:32

　　随着基因编辑技术的飞速发展,CRISPR/Cas9技术逐渐成为主流。为了验证CRISPR/Cas9系统在鸡基因组上的切割效率,在鸡肌肉生长抑制素（Myostatin,MSTN）基因第1、第2外显子上各自筛选了5个Cas9靶点,构建p X330-sg RNA表达载体;将GFP质粒电转入DF-1细胞,通过检测表达GFP细胞的比例来优化电转程序;将载体用优化后的电转程序电转入DF-1细胞,培养72 h;最后收集细胞提取基因组,通过T7核酸内切酶Ⅰ（T7EⅠ）酶切试验,选出具有Cas9切割效率的靶点片段,将该片段连入p MD19-T载体,测序并分析结果。结果表明CRISPR/Cas9系统可以成功对DF-1细胞基因组进行切割并引入突变,其中1号外显子上4号靶点的突变率为64.3%,2号外显子上2号靶点的突变率为23.3%。研究表明CRISPR/Cas9系统在DF-1细胞中可以有效切割基因组,为CRISPR/Cas9技术应用于鸡的基因组编辑提供科学依据。 

【文章来源】：中国家禽. 2016年07期 北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1.材料与方法
    1.1试验材料
    1.2试验方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 细胞电转
        1.2.3 总RNA提取及反转录
        1.2.4 实时定量PCR
        1.2.5 载体构建
        1.2.6 连接反应
        1.2.7 转化
        1.2.8 去内毒素质粒提取
        1.2.9 细胞基因组提取
        1.2.10 T7 Endonuclease Ⅰ（T7EⅠ）酶切
2 结果与分析
    2.1 电转程序选择
    2.2 Cas9切割效率验证
3 讨论


【参考文献】：
硕士论文
[1]利用CRISPR/Cpf1系统构建DDX21基因敲除模型及功能初步研究[D]. 鲁国涛.中国农业科学院 2019
[2]应用CRISPR/Cas9及超表达技术研究miR-2954和YY1在鸡睾丸支持细胞调控精子发育中的作用[D]. 乔凌云.华中农业大学 2019
[3]AAV-SaCas9-sgRNA腺相关病毒的包装及其对Balb-c小鼠MSTN基因的敲除[D]. 王娟.河南农业大学 2019
[4]MSTN基因敲除滩羊的制备与评价[D]. 丁毅.西北农林科技大学 2019
[5]烟草响应低温胁迫的生化与分子基础及TCP基因编辑突变的初步研究[D]. 肖玉洁.湖南农业大学 2018
[6]CRISPR/Cas9介导鸡肌肉生长和黑色素合成相关基因敲除研究[D]. 尹亚军.陕西理工大学 2017
[7]CPED1基因在鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化过程中的作用[D]. 王飞.扬州大学 2017



本文编号：2917300