核定位信号肽介导猪圆环病毒2型Cap蛋白出核机制的研究
发布时间：2020-12-26 15:16
核定位信号肽（Nuclear localization signal,NLS）是一段由带正电荷的碱性氨基酸及其旁侧的调控元件组成的短肽,它能介导蛋白或核酸进入细胞核。目前研究发现,在生物体内各种功能性分子中,核定位信号肽广泛存在。蛋白分子通过核定位信号肽与转运蛋白结合,穿过核孔复合体（Nuclear pore complexes,NPC）进入出细胞核,从而完成自身结构的修饰、折叠包装或与特定靶分子结合,进而实现特定生物学信息的传递。PCV2 Cap蛋白是构成PCV2核衣壳结构的主要蛋白分子。根据研究报道,Cap蛋白N端141位氨基酸为富含精氨酸的NLS,能够介导蛋白进入细胞核,但是目前Cap蛋白进入细胞核后是否出核以及出核的调控机制未知。基于以上问题,我们针对PCV2 Cap蛋白进行了如下研究:1.猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的制备与鉴定。从临床病料中扩增获得PCV2 Cap基因,并进行序列比对和抗原性分析,发现扩增获得的PCV2 Cap基因属于PCV2d亚型,在抗原性方面与国内PCV2a、PCV2b代表性毒株、以及疫苗株之间存在4个差异部位;利用杆状病毒表达系统...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PCV2Cap基因的扩增100
24图 2.2 PCV2 Cap 基因遗传进化分析（A）和 Cap 编码蛋白的抗原性分析（B）◆：表示基因型代表毒株；●：表示本研究所获得毒株；↑：抗原性不同的区Fig.2.2 Phylogenic analysis of PCV2 Cap gene (A) and antigenicity analysis of Cap proerence strains for phylogenic analysis；●：Obtained strain in this study; ↑: Antigenicity载体的构建及鉴定 扩增获得 PCV2d Cap 基因，连接到 pFastBac1 载体获得 pFastBac-Cap 重ac-Cap 质粒转化 DH10Bac 感受态细胞，获得重组杆粒 Bacmid-Cap，经约 0.7kb 和 2.8kb 大小的目的片段，与预期结果一致（图 3.3）。0.850 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 2
图 2.3 重组穿梭载体的 PCR 鉴定（A）和重组杆粒的 PCR 鉴定（B）M：DNA 分子质量标准；1～4：重组 pFastBac-Cap；5～8：重组 Bacmid-CapFig. 2.3 Identification of recombinant pFastBac-Cap (A) and Bacmid-Cap (B) by PCR.M: DNA standard molecule weight; 1～4: Recombinant pFastBac-Cap; 5～8: Recombinant Bacmid-Cap.2.4 重组 PCV2d Cap 蛋白的表达提取重组杆粒 Bacmid-Cap，然后转染 Sf9 细胞制备重组杆状病毒，将 Cap 重组杆状病毒 Sf9 昆虫细胞进行 SDS-PAGE 电泳，同时以感染正常杆状病毒的 Sf9 细胞和空白 Sf9 细胞照，发现在大约 28～30ku 处有明显的特异性条带（图 2.4A）。进一步经抗 PCV2 Cap 蛋白隆抗体进行 Western blot 分析，结果显示所表达的条带与抗 PCV2 Cap 蛋白的单克隆抗体异性反应（图 2.4B）。500750250100500250100
【参考文献】：
期刊论文
[1]广西猪圆环病毒2型全基因组进化分析[J]. 张民秀,谢芝勋,谢丽基,黄莉,谢志勤,刘加波,邓显文,罗思思,黄娇玲. 中国兽医科学. 2017(04)
[2]猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与遗传进化分析[J]. 徐朋丽,张宇,韩昊莹,乔涵,杨兴武,郭官鹏,王晓星,刘起涛,陈红英. 中国预防兽医学报. 2016(12)
[3]四川地区腹泻仔猪群猪圆环病毒Ⅱ型分子流行病学调查[J]. 赵军,周桐枫,刘鹏娟,黄剑波,姜子义,朱玲,徐志文. 中国预防兽医学报. 2016(07)
[4]猪圆环病毒2型广西株的分型及基因重组分析[J]. 郭旋,肖雄,黎木兰,龙凤,刘欢,薛辉,覃艳然,侯韶毅,黄伟坚. 中国兽医科学. 2013(09)
[5]鄂西北地区猪圆环病毒2型抗体水平监测[J]. 熊江林,周华林,王长义,杨绪波,谭华祥. 中国畜牧兽医. 2008(09)
[6]湖南省部分猪场猪圆环病毒2型的感染和流行[J]. 董欣宇,张志,卫广森,李晓成,张燕霞,黄保续. 中国动物检疫. 2008(02)
[7]猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备[J]. 侯强,彭伍平,孙元,仇华吉. 中国兽医科学. 2008(01)
[8]四川部分猪场猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒Ⅱ型血清学调查[J]. 李金海,马孟根,李春,邢坤,郭莉,吴萱,张永宁,喻英. 黑龙江畜牧兽医. 2007(11)
[9]最新动物病毒分类简介[J]. 陆承平. 中国病毒学. 2005(06)
[10]广西断奶仔猪猪圆环病毒2型的检测[J]. 黄伟坚,芦银华,覃广胜,蓝可耀,阮强,莫荣燕,温传新,张美,余克伦. 中国兽医科技. 2003(01)
本文编号：2939951
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PCV2Cap基因的扩增100
24图 2.2 PCV2 Cap 基因遗传进化分析（A）和 Cap 编码蛋白的抗原性分析（B）◆：表示基因型代表毒株；●：表示本研究所获得毒株；↑：抗原性不同的区Fig.2.2 Phylogenic analysis of PCV2 Cap gene (A) and antigenicity analysis of Cap proerence strains for phylogenic analysis；●：Obtained strain in this study; ↑: Antigenicity载体的构建及鉴定 扩增获得 PCV2d Cap 基因，连接到 pFastBac1 载体获得 pFastBac-Cap 重ac-Cap 质粒转化 DH10Bac 感受态细胞，获得重组杆粒 Bacmid-Cap，经约 0.7kb 和 2.8kb 大小的目的片段，与预期结果一致（图 3.3）。0.850 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 2
图 2.3 重组穿梭载体的 PCR 鉴定（A）和重组杆粒的 PCR 鉴定（B）M：DNA 分子质量标准；1～4：重组 pFastBac-Cap；5～8：重组 Bacmid-CapFig. 2.3 Identification of recombinant pFastBac-Cap (A) and Bacmid-Cap (B) by PCR.M: DNA standard molecule weight; 1～4: Recombinant pFastBac-Cap; 5～8: Recombinant Bacmid-Cap.2.4 重组 PCV2d Cap 蛋白的表达提取重组杆粒 Bacmid-Cap，然后转染 Sf9 细胞制备重组杆状病毒，将 Cap 重组杆状病毒 Sf9 昆虫细胞进行 SDS-PAGE 电泳，同时以感染正常杆状病毒的 Sf9 细胞和空白 Sf9 细胞照，发现在大约 28～30ku 处有明显的特异性条带（图 2.4A）。进一步经抗 PCV2 Cap 蛋白隆抗体进行 Western blot 分析，结果显示所表达的条带与抗 PCV2 Cap 蛋白的单克隆抗体异性反应（图 2.4B）。500750250100500250100
【参考文献】：
期刊论文
[1]广西猪圆环病毒2型全基因组进化分析[J]. 张民秀,谢芝勋,谢丽基,黄莉,谢志勤,刘加波,邓显文,罗思思,黄娇玲. 中国兽医科学. 2017(04)
[2]猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与遗传进化分析[J]. 徐朋丽,张宇,韩昊莹,乔涵,杨兴武,郭官鹏,王晓星,刘起涛,陈红英. 中国预防兽医学报. 2016(12)
[3]四川地区腹泻仔猪群猪圆环病毒Ⅱ型分子流行病学调查[J]. 赵军,周桐枫,刘鹏娟,黄剑波,姜子义,朱玲,徐志文. 中国预防兽医学报. 2016(07)
[4]猪圆环病毒2型广西株的分型及基因重组分析[J]. 郭旋,肖雄,黎木兰,龙凤,刘欢,薛辉,覃艳然,侯韶毅,黄伟坚. 中国兽医科学. 2013(09)
[5]鄂西北地区猪圆环病毒2型抗体水平监测[J]. 熊江林,周华林,王长义,杨绪波,谭华祥. 中国畜牧兽医. 2008(09)
[6]湖南省部分猪场猪圆环病毒2型的感染和流行[J]. 董欣宇,张志,卫广森,李晓成,张燕霞,黄保续. 中国动物检疫. 2008(02)
[7]猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备[J]. 侯强,彭伍平,孙元,仇华吉. 中国兽医科学. 2008(01)
[8]四川部分猪场猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒Ⅱ型血清学调查[J]. 李金海,马孟根,李春,邢坤,郭莉,吴萱,张永宁,喻英. 黑龙江畜牧兽医. 2007(11)
[9]最新动物病毒分类简介[J]. 陆承平. 中国病毒学. 2005(06)
[10]广西断奶仔猪猪圆环病毒2型的检测[J]. 黄伟坚,芦银华,覃广胜,蓝可耀,阮强,莫荣燕,温传新,张美,余克伦. 中国兽医科技. 2003(01)
本文编号：2939951
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