AMPK信号通路在蛋鸡原代肝细胞脂质代谢中的作用
发布时间：2021-01-03 00:53
为了探讨AMPK信号通路在蛋鸡原代肝细胞脂质代谢中的作用。通过改良原位二步灌流法获得了高活性鸡原代肝细胞,然后参照非酒精性脂肪肝体外建模方法,使用脂肪酸（油酸:棕榈酸为2:1）处理肝细胞建立脂肪变性模型,分为正常肝细胞组（Control组）,正常肝细胞+AICAR组（Con+AICAR组）,正常肝细胞+Compoud C组（Control+Comp C组）,脂肪变性肝细胞组（FFA组）,脂肪变性肝细胞+AICAR组（FFA+AICAR组）,脂肪变性肝细胞+compound C组（FFA+comp C）六组。用AMPK的激活剂AICAR和抑制剂Compoud C分别对正常肝细胞和脂肪变性肝细胞进行处理,测定各组肝细胞中血脂四项（甘油三酯TG,总胆固醇TC,低密度脂蛋白LDL-ch,高密度脂蛋白HDL-ch）含量,以及AMPK信号通路相关基因和脂质胆固醇相关基因（AMPKαl,LKBI,ACC;FAS,HNF4α,HMGR,PPARα;CPTI,GAPT）mRNA表达量差异。结果如下:1.完善原代蛋鸡肝细胞培养体系,培养的原代鸡肝细胞胞核清晰,培养24 h细胞分化完成,细胞活力指数高。2....
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一部分 文献综述
1.1 蛋鸡脂肪出血综合征疾病（FLHS）
1.2 AMPK及其信号通路
1.2.1 AMPK激活s剂AICAR
1.2.2 AMPK抑制剂Compoud C
1.3 AMPK与鸡肝脏中的脂质代谢和胆固醇合成潜在关系
1.3.1 蛋鸡出血综合征体内模型建立
1.3.2 脂肪变性肝细胞体外模型建立
1.4 研究目的及意义
第二部分 试验研究
2.1 材料与方法
2.1.1 试验动物和饲养管理
2.1.2 主要试剂和药品
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 溶液配制:
2.1.5 原代蛋鸡肝细胞培养
2.1.5.1 技术路线
2.1.5.2 原位二步灌流法提取肝细胞
2.1.6 蛋鸡脂肪变性模型（FFA模型）建立
2.1.6.1 技术路线:
2.1.6.2 建立油酸/棕榈酸FFA致成年蛋鸡肝细胞脂肪变性模型
2.1.6.3 鉴定蛋鸡肝细胞脂肪变性模型构建
2.1.7 AICAR和Compoud C在原代成年蛋鸡肝细胞中激活和抑制有效时长
2.1.8 AMPK信号通路在蛋鸡原代肝细胞脂质代谢中的作用
2.1.9 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C对蛋鸡原代肝细胞相关脂质代谢胆固醇合成基因表达的影响
2.1.9.1 成年蛋鸡肝细胞总RNA的提取（Trizol法）
2.1.9.2 RNA逆转录-聚合酶链反应
2.1.9.3 引物设计与合成
2.1.9.4 SYBR Green RT-PCR反应
2.1.9.5 结果统计
2.1.10 数据处理
2.2 结果分析
2.2.1 成年蛋鸡原代肝细胞的分离培养
2.2.2 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C在蛋鸡原代肝细胞中激活和抑制最佳作用时间
2.2.3 蛋鸡原代肝细胞脂肪变性模型（Free fatty acid,FFA模型）建立
2.2.3.1 成年蛋鸡肝细胞细胞活性
2.2.3.2 蛋鸡肝细胞脂肪变性（FFA）模型油红O染色鉴定
2.2.3.3 蛋鸡肝细胞脂肪变性（FFA）模型油红定量鉴定
2.2.4 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C对蛋鸡原代肝细胞脂肪变性模型中细胞的脂质代谢影响
2.2.4.1 蛋鸡肝细胞内低密度脂蛋白浓度
2.2.4.2 蛋鸡肝细胞内高密度脂蛋白浓度
2.2.4.3 蛋鸡细胞内总胆固醇（TC）浓度
2.2.4.4 蛋鸡肝细胞内甘油三脂（TG）浓度
2.2.5 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C对蛋鸡原代肝细胞脂肪变性模型中细胞相关脂质代谢和胆固醇mRNA相对表达变化
2.2.5.1 蛋鸡肝细胞提取RNA质量和纯度
2.2.5.2 蛋鸡肝细胞中LKB1mRNA表达变化
2.2.5.3 蛋鸡肝细胞中AMPKα1mRNA表达变化
2.2.5.4 蛋鸡肝细胞中ACCmRNA表达量变化
2.2.5.5 蛋鸡肝细胞中CPT1mRNA表达量变化
2.2.5.6 蛋鸡肝细胞中HMGR mRNA表达量变化
2.2.5.7 蛋鸡肝细胞中GAPTmRNA表达量变化
2.2.5.8 蛋鸡肝细胞中FAS mRNA表达量变化
2.2.5.9 蛋鸡肝细胞中PPARα mRNA表达量变化
2.2.5.10 蛋鸡肝细胞中HNF4α mRNA表达量变化
2.3 讨论
2.3.1 蛋鸡肝细胞脂肪变性模型的建立
2.3.2 AMPK活性变化与成年蛋鸡肝细胞生化指标的关系
2.3.3 蛋鸡肝细胞对AMPK信号通路相关基因mRNA表达的影响
2.3.4 蛋鸡脂肪变肝细胞对脂肪酸氧化相关基因的影响
2.3.5 蛋鸡脂肪变肝细胞对胆固醇合成相关基因的影响
第三部分 全文总结
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]靶向高密度脂蛋白的动脉粥样硬化防治研究:从升高水平到改善功能[J]. 李者龙,侯广立,袁丽君. 心脏杂志. 2019(02)
[2]野艾蒿总黄酮的提取及其对HepG2细胞脂代谢影响的药效学研究[J]. 李洋,周成江. 包头医学院学报. 2018(06)
[3]鸡原代肝细胞培养及叶酸对脂质代谢相关基因表达的影响[J]. 刘艳利,党燕娜,段玉兰,杨小军. 中国农业科学. 2017(21)
[4]甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值和谷氨酰转移酶对非酒精性脂肪肝的预测价值[J]. 林仿,任跃忠,褚建平,周琼. 中华全科医学. 2017(07)
[5]斑马鱼血管内脂代谢研究方法的构建[J]. 陈侃,王长谦,范虞琪,韩志华,汪月,高霖,曾华盨. 中国动脉硬化杂志. 2017(04)
[6]三种不同脂肪染色方法的比较[J]. 陈敬文,游淑源,王天娲,金洪涛,罗金风. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2016(03)
[7]低蛋白高能量日粮:导致笼养白来航蛋鸡脂肪肝出血综合症的可能原因[J]. 王爽. 广东饲料. 2016(04)
[8]90日龄蛋鸡发生脂肪肝综合征的病例诊断[J]. 汪德生,彭晓军. 黑龙江畜牧兽医. 2015(08)
[9]Systems biology approaches for studying the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease[J]. Ciarán P Fisher,Andrzej M Kierzek,Nick J Plant,J Bernadette Moore. World Journal of Gastroenterology. 2014(41)
[10]肝细胞脂肪变性模型中Sec61α的表达及可能作用机制[J]. 王军,黄殿静,赖姝婕,熊吉,魏艳玲,李青,李砚,陈潇迪,王斌,陈东风. 第三军医大学学报. 2014(08)
博士论文
[1]高脂日粮诱导的鸡脂肪肝表型遗传的分子机制[D]. 张永宏.中国农业科学院 2018
[2]白藜芦醇对HepG2细胞的影响及机制探讨[D]. 胡超.中南大学 2012
[3]鹅脂肪代谢基因多态性与屠宰性状的相关分析及其组织表达差异研究[D]. 吴华莉.四川农业大学 2010
[4]AMPK对产蛋鸡胆固醇代谢的调节作用[D]. 陈晓春.四川农业大学 2006
硕士论文
[1]AMPK信号通路与高能低蛋白日粮致蛋鸡FLHS的关系研究[D]. 高晓娜.江西农业大学 2017
[2]Mst1在白藜芦醇抑制动脉粥样硬化进展中的作用机制研究[D]. 段宇.第四军医大学 2017
[3]吡咯喹啉醌钠（PQQ.Na2）对蛋鸡脂肪肝的调控作用[D]. 赵芹.中国农业科学院 2014
[4]PPARs及其靶向基因在雌激素诱发蛋鸡脂肪肝出血综合征中的作用研究[D]. 陈焱.中国农业科学院 2013
[5]芥菜籽在保护肝脏脂肪样变中的作用机制[D]. 李新艳.南方医科大学 2013
[6]广西桂香鸡适宜日粮能量蛋白水平研究[D]. 许晟玮.广西大学 2012
[7]糖皮质激素和热应激对蛋鸡肝脏脂肪代谢影响[D]. 李艳.山东农业大学 2011
[8]脂肪细胞与原代肝细胞共培养可以诱导肝细胞在细胞水平上发生胰岛素抵抗[D]. 张日华.南京医科大学 2007
[9]糖皮质激素对大鼠原代肝细胞糖原代谢的双向调节作用[D]. 郑兴锋.第二军医大学 2007
[10]油酸诱导的脂肪肝离体细胞模型中葡萄糖转运体Ⅱ表达变化及意义[D]. 李懿.四川大学 2004
本文编号：2953985
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一部分 文献综述
1.1 蛋鸡脂肪出血综合征疾病（FLHS）
1.2 AMPK及其信号通路
1.2.1 AMPK激活s剂AICAR
1.2.2 AMPK抑制剂Compoud C
1.3 AMPK与鸡肝脏中的脂质代谢和胆固醇合成潜在关系
1.3.1 蛋鸡出血综合征体内模型建立
1.3.2 脂肪变性肝细胞体外模型建立
1.4 研究目的及意义
第二部分 试验研究
2.1 材料与方法
2.1.1 试验动物和饲养管理
2.1.2 主要试剂和药品
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 溶液配制:
2.1.5 原代蛋鸡肝细胞培养
2.1.5.1 技术路线
2.1.5.2 原位二步灌流法提取肝细胞
2.1.6 蛋鸡脂肪变性模型（FFA模型）建立
2.1.6.1 技术路线:
2.1.6.2 建立油酸/棕榈酸FFA致成年蛋鸡肝细胞脂肪变性模型
2.1.6.3 鉴定蛋鸡肝细胞脂肪变性模型构建
2.1.7 AICAR和Compoud C在原代成年蛋鸡肝细胞中激活和抑制有效时长
2.1.8 AMPK信号通路在蛋鸡原代肝细胞脂质代谢中的作用
2.1.9 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C对蛋鸡原代肝细胞相关脂质代谢胆固醇合成基因表达的影响
2.1.9.1 成年蛋鸡肝细胞总RNA的提取（Trizol法）
2.1.9.2 RNA逆转录-聚合酶链反应
2.1.9.3 引物设计与合成
2.1.9.4 SYBR Green RT-PCR反应
2.1.9.5 结果统计
2.1.10 数据处理
2.2 结果分析
2.2.1 成年蛋鸡原代肝细胞的分离培养
2.2.2 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C在蛋鸡原代肝细胞中激活和抑制最佳作用时间
2.2.3 蛋鸡原代肝细胞脂肪变性模型（Free fatty acid,FFA模型）建立
2.2.3.1 成年蛋鸡肝细胞细胞活性
2.2.3.2 蛋鸡肝细胞脂肪变性（FFA）模型油红O染色鉴定
2.2.3.3 蛋鸡肝细胞脂肪变性（FFA）模型油红定量鉴定
2.2.4 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C对蛋鸡原代肝细胞脂肪变性模型中细胞的脂质代谢影响
2.2.4.1 蛋鸡肝细胞内低密度脂蛋白浓度
2.2.4.2 蛋鸡肝细胞内高密度脂蛋白浓度
2.2.4.3 蛋鸡细胞内总胆固醇（TC）浓度
2.2.4.4 蛋鸡肝细胞内甘油三脂（TG）浓度
2.2.5 AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C对蛋鸡原代肝细胞脂肪变性模型中细胞相关脂质代谢和胆固醇mRNA相对表达变化
2.2.5.1 蛋鸡肝细胞提取RNA质量和纯度
2.2.5.2 蛋鸡肝细胞中LKB1mRNA表达变化
2.2.5.3 蛋鸡肝细胞中AMPKα1mRNA表达变化
2.2.5.4 蛋鸡肝细胞中ACCmRNA表达量变化
2.2.5.5 蛋鸡肝细胞中CPT1mRNA表达量变化
2.2.5.6 蛋鸡肝细胞中HMGR mRNA表达量变化
2.2.5.7 蛋鸡肝细胞中GAPTmRNA表达量变化
2.2.5.8 蛋鸡肝细胞中FAS mRNA表达量变化
2.2.5.9 蛋鸡肝细胞中PPARα mRNA表达量变化
2.2.5.10 蛋鸡肝细胞中HNF4α mRNA表达量变化
2.3 讨论
2.3.1 蛋鸡肝细胞脂肪变性模型的建立
2.3.2 AMPK活性变化与成年蛋鸡肝细胞生化指标的关系
2.3.3 蛋鸡肝细胞对AMPK信号通路相关基因mRNA表达的影响
2.3.4 蛋鸡脂肪变肝细胞对脂肪酸氧化相关基因的影响
2.3.5 蛋鸡脂肪变肝细胞对胆固醇合成相关基因的影响
第三部分 全文总结
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]靶向高密度脂蛋白的动脉粥样硬化防治研究:从升高水平到改善功能[J]. 李者龙,侯广立,袁丽君. 心脏杂志. 2019(02)
[2]野艾蒿总黄酮的提取及其对HepG2细胞脂代谢影响的药效学研究[J]. 李洋,周成江. 包头医学院学报. 2018(06)
[3]鸡原代肝细胞培养及叶酸对脂质代谢相关基因表达的影响[J]. 刘艳利,党燕娜,段玉兰,杨小军. 中国农业科学. 2017(21)
[4]甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值和谷氨酰转移酶对非酒精性脂肪肝的预测价值[J]. 林仿,任跃忠,褚建平,周琼. 中华全科医学. 2017(07)
[5]斑马鱼血管内脂代谢研究方法的构建[J]. 陈侃,王长谦,范虞琪,韩志华,汪月,高霖,曾华盨. 中国动脉硬化杂志. 2017(04)
[6]三种不同脂肪染色方法的比较[J]. 陈敬文,游淑源,王天娲,金洪涛,罗金风. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2016(03)
[7]低蛋白高能量日粮:导致笼养白来航蛋鸡脂肪肝出血综合症的可能原因[J]. 王爽. 广东饲料. 2016(04)
[8]90日龄蛋鸡发生脂肪肝综合征的病例诊断[J]. 汪德生,彭晓军. 黑龙江畜牧兽医. 2015(08)
[9]Systems biology approaches for studying the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease[J]. Ciarán P Fisher,Andrzej M Kierzek,Nick J Plant,J Bernadette Moore. World Journal of Gastroenterology. 2014(41)
[10]肝细胞脂肪变性模型中Sec61α的表达及可能作用机制[J]. 王军,黄殿静,赖姝婕,熊吉,魏艳玲,李青,李砚,陈潇迪,王斌,陈东风. 第三军医大学学报. 2014(08)
博士论文
[1]高脂日粮诱导的鸡脂肪肝表型遗传的分子机制[D]. 张永宏.中国农业科学院 2018
[2]白藜芦醇对HepG2细胞的影响及机制探讨[D]. 胡超.中南大学 2012
[3]鹅脂肪代谢基因多态性与屠宰性状的相关分析及其组织表达差异研究[D]. 吴华莉.四川农业大学 2010
[4]AMPK对产蛋鸡胆固醇代谢的调节作用[D]. 陈晓春.四川农业大学 2006
硕士论文
[1]AMPK信号通路与高能低蛋白日粮致蛋鸡FLHS的关系研究[D]. 高晓娜.江西农业大学 2017
[2]Mst1在白藜芦醇抑制动脉粥样硬化进展中的作用机制研究[D]. 段宇.第四军医大学 2017
[3]吡咯喹啉醌钠（PQQ.Na2）对蛋鸡脂肪肝的调控作用[D]. 赵芹.中国农业科学院 2014
[4]PPARs及其靶向基因在雌激素诱发蛋鸡脂肪肝出血综合征中的作用研究[D]. 陈焱.中国农业科学院 2013
[5]芥菜籽在保护肝脏脂肪样变中的作用机制[D]. 李新艳.南方医科大学 2013
[6]广西桂香鸡适宜日粮能量蛋白水平研究[D]. 许晟玮.广西大学 2012
[7]糖皮质激素和热应激对蛋鸡肝脏脂肪代谢影响[D]. 李艳.山东农业大学 2011
[8]脂肪细胞与原代肝细胞共培养可以诱导肝细胞在细胞水平上发生胰岛素抵抗[D]. 张日华.南京医科大学 2007
[9]糖皮质激素对大鼠原代肝细胞糖原代谢的双向调节作用[D]. 郑兴锋.第二军医大学 2007
[10]油酸诱导的脂肪肝离体细胞模型中葡萄糖转运体Ⅱ表达变化及意义[D]. 李懿.四川大学 2004
本文编号：2953985
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