奶牛阴道益生菌的分离筛选及其益生作用的研究

发布时间：2021-01-03 02:10

　　乳酸菌作为益生菌成员,其活菌以及代谢产物不仅具有抑菌功能,还能够增强机体免疫,且不易产生耐药性,对人畜无毒副作用。乳酸菌被确认为是健康阴道微生物菌群中的优势物种,缺乏乳酸菌被认为会破坏阴道微生物菌群平衡,降低免疫屏障功能,继而引发各种生殖道炎症,寄生虫病以及真菌、衣原体的感染等。本研究从健康奶牛阴道内分离、纯化并筛选出无芽孢无荚膜且形体正常、菌体染色呈革兰氏阳性,菌落形态、菌体特征以及生长特性具有传代稳定性的、同时具有益生特性的优势乳酸菌。在此基础上,对其抗菌作用、抗菌成分进行了研究,探讨了SQ0048对TLRs介导的MyD88/NF-KB信号通路的影响。以期为制备治疗奶牛阴道炎症的微生态制剂提供试验依据和奠定理论基础。具体研究内容如下:1.为了获得能够防治奶牛生殖道炎的益生乳酸菌菌株,采用微生物学方法,对50例健康奶牛阴道菌群进行了初步分离;分别采用发酵工程学技术、显微镜检查法、革兰氏染色法及酸度测定方法,测定了初步分离乳酸菌的传代稳定性、染色特性、分类及产酸性能;分别采用显微镜检查法、生化鉴定法和分子生物学方法,对初步筛选出的8株益生乳酸菌进行了形态学鉴定、生理生化特性及16srD... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：165 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 乳酸菌益生作用及其机制的研究进展
        1.1.1 抑制病原菌作用及其机制
        1.1.2 抗氧化功能
        1.1.3 免疫调节功能
    1.2 乳酸菌在动物疾病防治中的研究进展
        1.2.1 乳酸菌在猪、鸡、犬等疾病防治中的研究进展
        1.2.2 乳酸菌在奶牛疾病防治中的研究进展
    1.3 乳酸菌与TLR相互作用的研究进展
        1.3.1 乳酸菌与TLR2和TLR4相关研究
        1.3.2 乳酸菌对TLRs介导的NF-κB信号途径的调节研究进展
        1.3.3 乳酸菌对TLRs介导的NF-κB信号途径相关细胞因子的研究进展
    1.4 研究目的与意义
2 奶牛阴道乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究
    2.1 试验材料
        2.1.1 标准菌株、质控菌株
        2.1.2 药品与试剂
        2.1.3 培养基
        2.1.4 仪器与设备
        2.1.5 采集地点、采集时间及试验样本
    2.2 数据统计与分析
    2.3 研究内容与方法
        2.3.1 样品采集
        2.3.2 乳酸菌菌株的分离与纯化
        2.3.3 奶牛阴道内优势乳酸菌的初步筛选
        2.3.4 奶牛阴道内优势乳酸菌菌株的鉴定
        2.3.5 奶牛阴道优势益生乳酸菌菌株的复筛研究
    2.4 结果
        2.4.1 健康奶牛阴道内乳酸菌的分离、纯化结果
        2.4.2 健康奶牛阴道内乳酸菌的初筛结果
        2.4.3 奶牛阴道内乳酸菌的鉴定结果
        2.4.4 奶牛阴道益生乳酸菌菌株的复筛结果
    2.5 讨论
    2.6 小结
3 分离优势乳酸菌抗菌成分及其抗菌作用的研究
    3.1 试验材料
        3.1.1 菌种
        3.1.2 药品与试剂
        3.1.3 培养基
        3.1.4 主要仪器设备
    3.2 数据统计与分析
    3.3 研究内容与方法
        3.3.1 SQ0048及SQ0054菌株抗菌成分抗菌肽的制备
        3.3.2 分离优势乳酸菌抗菌成分表达物的检测
        3.3.3 SQ0048及SQ0054菌株与其抗菌肽基因表达物的抗菌活性比较研究
    3.4 试验结果
        3.4.1 SQ0048及SQ0054菌株抗菌成分的研究
        3.4.2 抗菌肽基因表达物的检测
        3.4.3 SQ0048及SQ0054菌株与其抗菌肽基因表达物的抗菌活性比较研究结果
    3.5 讨论
    3.6 小结
4 SQ0048乳酸菌对TLRs介导的MyD88-NF-κB信号转导通路的影响
    4.1 试验材料
        4.1.1 试验用菌种
        4.1.2 阴道组织样本
        4.1.3 药品与试剂
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 数据统计与分析
    4.3 研究内容与方法
        4.3.1 奶牛阴道上皮细胞的分离培养鉴定
        4.3.2 奶牛阴道上皮细胞的生物学特性研究
        4.3.3 SQ0048影响奶牛阴道上皮细胞IL-1β表达的量效及时效关系测定
        4.3.4 TLRs-MyD88/NF-κB信号通路中各抑制剂抑制效应的时效、量效关系分析
        4.3.5 TLRs-MyD88/NF-κB信号通路中各种抑制剂及SQ0048菌株对奶牛阴道上皮细胞的毒性试验
        4.3.6 SQ0048菌株对奶牛阴道上皮细胞中TLRs-MyD88/NF-κB信号通路的影响
    4.4 试验结果
        4.4.1 奶牛阴道上皮细胞的分离、培养及纯化研究
        4.4.2 奶牛阴道上皮细胞的鉴定
        4.4.3 奶牛阴道上皮细胞纯度测定结果
        4.4.4 奶牛阴道上皮细胞的生长特性研究
        4.4.5 SQ0048菌株影响奶牛阴道上皮细胞IL-1β表达的量效及时效关系测定结果
        4.4.6 TLRs-MyD88/NF-κB信号通路中各抑制剂抑制效应的时效、量效关系分析结果
        4.4.7 SQ0048菌株及各抑制剂对奶牛阴道上皮细胞的毒性试验结果
        4.4.8 SQ0048菌株对奶牛阴道上皮细胞中TLRs-MyD88/NF-KB信号通路的影响结果
    4.5 讨论
    4.6 小结
5 全文讨论
6 全文结论
7 创新点
致谢
参考文献
附录
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]2株分离乳酸菌对奶牛阴道上皮细胞的黏附作用[J]. 牛春宇,程超,王潇,刘彦民,黄少磊,李培锋.  中国兽医学报. 2018(12)
[2]抑郁症患者血清TNF-α、IL-8、ICAM-1、NF-κB水平及其意义[J]. 陆梅娟,莫亚莉.  中国现代医学杂志. 2018(32)
[3]AhR调控炎性细胞因子的研究进展[J]. 朱俊宇,范霞,梁华平.  免疫学杂志. 2017(01)
[4]产过氧化氢酶的乳酸菌的筛选和产酶条件的研究[J]. 唐丹玲,唐文胜.  食品与发酵工业. 1992(06)



本文编号：2954108