猪流行性腹泻病毒SC-P株生产用种用特性研究

发布时间：2021-01-08 05:29

　　猪流行性腹泻病（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的以水样腹泻、呕吐为主要特征的传染病,该病能够感染所有年龄段猪只,死亡率居高不下。该病自上世纪70年代发现以来,就成为养猪业的一大难题,在短时间内,给欧洲和亚洲的养猪业带来了巨大的损失,因此,对PEDV疫苗的开发变得尤为重要,而生产用种毒的特性研究则是疫苗研发的基础。本研究对实验室分离保存的PEDV-SC-P毒株在非洲绿猴传代肾细胞（Vero）上进行了传代增殖培养,按照《中国兽药典》（2010版）和《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》（2001版）要求,对生产用Vero细胞进行纯净性检验,对PEDV-SC-P毒株的增殖特性、遗传稳定性、理化特性、纯净性、安全性、免疫原性、特异性和种毒最佳保存条件等进行了检测和研究,从而评估其作为疫苗种毒的开发前景和价值。通过纯净性检验得出,生产用Vero细胞和PEDV种毒均纯净性高,无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染；增殖特性和遗传稳定性研究表明,PEDV种毒在Vero细胞上连续传代40次,均有稳定细胞病变出现（CPE）,病毒在细胞质中进行增殖,在接毒36h后病毒含量达到高峰,且毒力稳定,遗... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略词
1 文献综述
    1.1 PEDV的发现
    1.2 PEDV病原学特征
        1.2.1 PEDV形态和理化特征
        1.2.2 PEDV血清型
        1.2.3 PEDV细胞培养特性
        1.2.4 PEDV致病机理
    1.3 PEDV的流行病学特点
    1.4 PEDV的基因结构
    1.5 PEDV的实验室诊断技术
    1.6 PEDV的疫苗发展
    1.7 研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 毒种与细胞
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 引物设计
        2.1.5 所用试剂的配制
        2.1.6 主要设备仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 建立细胞库
        2.2.2 Vero细胞的纯净性检测
        2.2.3 PEDV的增殖培养及病变观察
        2.2.4 PEDV种毒的一步生长曲线测定
        2.2.5 PEDV种毒的遗传稳定性检验
        2.2.6 PEDV种毒的鉴定
        2.2.7 种毒的理化特性研究
        2.2.8 PEDV-SC-P毒株的检验
        2.2.9 建立种子批
3 结果
    3.1 VERO细胞的培养结果
    3.2 VERO细胞的纯净性检测结果
        3.2.1 Vero细胞的无菌检测结果
        3.2.2 Vero细胞的支原体检测结果
    3.3 PEDV的增殖培养及病变观察结果
    3.4 PEDV种毒一步生长曲线的测定结果
    3.5 PEDV种毒的遗传稳定性检验结果
    3.6 PEDV种毒的鉴定结果
        3.6.1 免疫荧光的鉴定结果
        3.6.2 RT-PCR的鉴定结果
    3.7 PEDV的理化特性研究结果
        3.7.1 种毒核酸类型鉴定结果
        3.7.2 种毒酯溶剂敏感试验结果
        3.7.3 种毒PH稳定性试验结果
        3.7.4 种毒热稳定性试验结果
    3.8 PEDV-SC-P毒株的检验结果
        3.8.1 病毒含量的检测结果
        3.8.2 种毒的纯净性检测
        3.8.3 种毒的外源病毒检测结果
        3.8.4 种毒的安全性检测结果
        3.8.5 种毒的免疫原性检测结果
        3.8.6 种毒的特异性检测结果
    3.9 PEDV种毒保存条件及时间试验结果
4 讨论
    4.1 关于PEDV疫苗
    4.2 关于PEDV种毒的增殖
    4.3 关于PEDV种毒的理化特性
    4.4 关于PEDV-SC-P株的检验
    4.5 关于种毒保存的条件及时间
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：2964007