猪链球菌2型Dbp基因缺失株的构建及特性分析

发布时间：2021-01-11 04:24

　　猪链球菌（Streptococcus suis,SS）能引起包括人和猪在内的多种疾病,是一种重要的人兽共患病病原菌,严重危害公共安全卫生。根据荚膜多糖抗原性的差异,将猪链球菌分为35个血清型,其中猪链球菌2型（SS2）分布最广且毒力最强。SS引起的猪链球菌病在世界范围内均有分布,近年来,SS2引起的病症在我国爆发了2次,造成人员伤亡和巨大的经济损失。目前SS2受到世界范围内的广泛关注,陆续报到了多种该菌的毒力因子,但其致病机理仍不清楚。本研究通过比较基因组学的方法,比较强毒株ZY05719和弱毒株T15的差异基因,找出ZY05719中有而T15中无的基因,这些差异基因可能与强毒株的毒力相关。从中筛选出Dbp基因并以此为研究对象,通过构建缺失突变株以及比较生物学特性,对Dbp在SS2致病过程中所起的作用进行研究,丰富了对该菌致病机理的认识。1猪链球菌2型强毒株ZY05719和弱毒株T15的基因组比较分析及Dbp基因在猪链球菌中的分布本实验用比较基因组学的方法,通过mauve软件比较弱毒株T15和强毒株ZY05719的差异基因,筛选出ZY05719中有而T15中无的基因,一共92个基因片段... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 猪链球菌2型主要毒力因子及致病机理
        1 猪链球菌2型毒力因子的研究进展
            1.1 荚膜多糖（Capsular polysaccharide,CPS）
            1.2 猪溶血素（Suilysin,SLY）
            1.3 溶菌酶释放蛋白（muramidase-released protein,MRP）和胞外因子（extracellularfactor,EF）
            1.4 血清浑浊因子（Opacity-factor of serum,OFS）
            1.5 分选酶（Sortases,SRT）
            1.6 丙氨酰酶A（D-alanylationA,DltA）
            1.7 纤连蛋白和纤连蛋白结合蛋白（Fibronectin-and fibrinogen-binding protein of S.suis,FBPS）
            1.8 3-磷酸甘油醛脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）
            1.9 猪链球菌烯醇化酶（SsEno）
            1.10 SalK和SalR二元调控基因
            1.11 酶类（enzyme）
        2 猪链球菌2型致病机理的研究
            2.1 粘附和侵袭机制
            2.2 SS2在血液中存活和中枢神经系统的入侵
        参考文献
第二篇 试验研究
    第二章 猪链球菌2型强毒株和弱毒株的基因组比较分析及DBP基因在猪链球菌中的分布
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株和质粒
                1.1.2 试剂与仪器
            1.2 序列分析
            1.3 细菌总RNA提取
                1.3.1 采用Trizolz法提取ZY05719菌株总RNA
                1.3.2 cDNA的合成
                1.3.3 qRT-PCR对Dbp基因的表达分析
            1.4 细菌基因组的提取
            1.5 Dbp基因在SS中分布检测
        2 试验结果
            2.1 序列分析
            2.2 Dbp基因的表达分析
            2.3 Dbp基因分布检测
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第三章 猪链球菌2型DBP基因缺失株的构建
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株、质粒
                1.1.2 试剂和仪器
            1.2 细菌的培养
            1.3 细菌基因组的提取
            1.4 引物设计
            1.5 基因缺失载体构建
                1.5.1 PCR
                1.5.2 琼脂糖凝胶电泳
                1.5.3 PCR扩增产物回收
                1.5.4 融合PCR
                1.5.5 融合PCR产物回收
                1.5.6 自杀性质粒pSET4S的提取
                1.5.7 目的片段的酶切、连接
                1.5.8 制备DH5α感受态细胞
                1.5.9 连接产物的转化及鉴定
            1.6 基因缺失株的构建
                1.6.1 感受态细胞的制备
                1.6.2 电转化
                1.6.3 缺失株（ΔDbp）的筛选及鉴定
        2 结果
            2.1 基因缺失质粒的构建
            2.2 缺失株（ΔDbp）的鉴定
        3 讨论
        参考文献
        abstracts
    第四章 猪链球菌2型DBP基因缺失株的生物学特性及致病性分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌种及试验动物
                1.1.2 主要仪器及试剂
            1.2 生长特性分析
            1.3 形态学比较
            1.4 斑马鱼毒力试验
        2 结果
            2.1 形态学比较
            2.2 生长特性分析
            2.3 斑马鱼毒力试验
        3 讨论
        参考文献
        Abstracts
    第五章 Dbp基因的克隆表达及其免疫反应性分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株和试验动物
                1.1.2 主要试剂和仪器
            1.2 血清制备
            1.3 重组质粒的构建与鉴定
                1.3.1 重组质粒的构建
                1.3.2 重组质粒的转化
                1.3.3 重组质粒的鉴定
            1.4 重组质粒的诱导表达
            1.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
            1.6 免疫转印
        2 结果
            2.1 重组表达质粒的鉴定
            2.2 诱导表达
            2.3 免疫转印
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究[J]. 付忠琳,骈亚亚,李雪琴,郑玉玲,马世良,袁媛,霍春月.  细胞与分子免疫学杂志. 2013(06)



本文编号：2970079