ATG13蛋白激活RLRs信号通路介导细胞抗病毒机制的研究
发布时间：2023-05-07 07:11
天然免疫是宿主抵御病原体侵染的第一道防线。当病原体侵染宿主细胞时,首先由宿主细胞的模式识别受体(pathogen-recognition receptors,PRRs)识别病原体的病原相关模式分子(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),从而引发一系列免疫应答反应,最终清除病原体。RIG-Ⅰ样受体(retinoic acid-induced geneⅠ-like receptors,RLRs)是细胞的主要模式识别受体之一。当宿主细胞的RLRs识别PAMPs后,可激活细胞中RLRs介导的信号通路,诱导干扰素(IFN)及其他基因的表达,促发一系列抗病毒反应。细胞自噬(Autophagy),是细胞在自噬相关基因(autophagy-related gene,ATG)编码蛋白的调控下,利用溶酶体降解并清除自身受损细胞的细胞器和大分子物质,维持细胞内稳态的过程,是细胞的一种自我保护机制。已报道有众多自噬相关蛋白参与细胞自噬,其中,ATG13蛋白在细胞自噬的起始阶段起关键作用。目前对ATG13蛋白在天然免疫RLRs信号通路中的作用未见报道。本论文...
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略语表
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1 国内外研究进展
1.1 天然免疫是宿主抵御病原微生物的第一道防线
1.2 RIG-Ⅰ样信号通路
1.2.1 RIG-Ⅰ样受体结构
1.2.2 RIG-Ⅰ样受体识别PAMPs机制
1.2.3 RIG-Ⅰ样受体介导抗病毒信号转导
1.2.4 肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)家族在RLRs中的作用
1.3 JAK-STAT信号通路的激活
1.4 自噬相关蛋白
1.5 ATG13 蛋白结构
1.6 ATG蛋白调控抗病毒天然免疫信号通路
1.6.1 ATG蛋白调控RLRs信号通路
1.6.2 调节STING介导的天然免疫应答
1.6.3 ATG蛋白参与炎症反应
1.7 ATG蛋白参与抗动物病原侵染
1.7.1 抑制病毒复制
1.7.2 破坏动物寄生虫纳虫泡
1.7.3 清除流产布鲁氏菌感染
1.7.4 宿主-病原互作
2 研究的目的和意义
第2章 ATG13 蛋白激活细胞RLRs信号通路
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 试剂及材料
1.1.2 细胞、质粒
1.1.3 设备
1.1.4 溶液配制
1.2 实验方法
1.2.1 pCMV-HA-ATG13质粒构建
1.2.2 HEK293T细胞培养
1.2.3 质粒提取
1.2.4 筛选可激活ISRE的 ATG蛋白
1.2.5 ATG13 蛋白激活IFN-β产生实验
1.2.6 RNA提取
1.2.7 反转录
1.2.8 实时荧光定量PCR检测IFN-β及下游ISGs基因表达
1.2.9 免疫共沉淀分析ATG13 蛋白与RLRs信号通路中的互作蛋白
1.2.10 Western blot检测ATG13 蛋白、RIG-IN蛋白表达以及siRNA干扰效果
1.2.11 统计学分析
2 实验结果
2.1 ATG13 蛋白激活ISRE报告基因活性
2.2 ATG13 蛋白激活ISRE-luc呈剂量依赖型
2.3 ATG13 蛋白激活细胞RLRs信号通路
2.4 最佳ATG13 siRNA的筛选
2.5 敲低ATG13对IFN-β及下游ISGs产生的影响
2.6 免疫共沉淀分析ATG13 蛋白可以与RLRs信号通路中接头蛋白MAVS、TRAF3以及TRAF6 发生相互作用
3 分析与讨论
4 小结
第3章 ATG13 蛋白调控EMCV和 VSV复制
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 试剂及材料
1.1.2 病毒、细胞、质粒
1.1.3 设备
1.1.4 溶液配制
1.2 实验方法
1.2.1 细胞及病毒培养
1.2.2 TCID50 测定
1.2.3 病毒在HEK293T细胞中增值验证
1.2.4 病毒感染及外源干扰素对ATG13 基因转录的影响
1.2.5 ATG13 蛋白抑制病毒复制实验
1.2.6 表观抗病毒因子产生检测实验
1.2.7 外源干扰素抑制EMCV和 VSV复制
1.2.8 JAK I Inhibitor抑制JAK-STAT信号通路
1.2.9 RNA提取、反转录实验、实时荧光定量PCR检测
1.2.10 Western blot检测ATG13 蛋白
2 实验结果
2.1 EMCV和 VSV均可在HEK293T细胞中复制
2.2 病毒感染后诱导ATG13 基因转录
2.3 外源干扰素诱导ATG13 基因转录
2.4 过表达ATG13 蛋白抑制病毒复制
2.5 敲低ATG13 对病毒复制的影响
2.6 ATG13 蛋白激活的细胞因子对病毒复制的影响
2.7 外源干扰素对病毒复制影响
2.8 JAK-STAT信号通路对病毒复制影响
3 分析与讨论
4 小论
第4章 全文结论
参考文献
附录
作者简介
硕士期间参与的课题研究
硕士期间发表的论文
致谢
本文编号：3810529
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略语表
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1 国内外研究进展
1.1 天然免疫是宿主抵御病原微生物的第一道防线
1.2 RIG-Ⅰ样信号通路
1.2.1 RIG-Ⅰ样受体结构
1.2.2 RIG-Ⅰ样受体识别PAMPs机制
1.2.3 RIG-Ⅰ样受体介导抗病毒信号转导
1.2.4 肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)家族在RLRs中的作用
1.3 JAK-STAT信号通路的激活
1.4 自噬相关蛋白
1.5 ATG13 蛋白结构
1.6 ATG蛋白调控抗病毒天然免疫信号通路
1.6.1 ATG蛋白调控RLRs信号通路
1.6.2 调节STING介导的天然免疫应答
1.6.3 ATG蛋白参与炎症反应
1.7 ATG蛋白参与抗动物病原侵染
1.7.1 抑制病毒复制
1.7.2 破坏动物寄生虫纳虫泡
1.7.3 清除流产布鲁氏菌感染
1.7.4 宿主-病原互作
2 研究的目的和意义
第2章 ATG13 蛋白激活细胞RLRs信号通路
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 试剂及材料
1.1.2 细胞、质粒
1.1.3 设备
1.1.4 溶液配制
1.2 实验方法
1.2.1 pCMV-HA-ATG13质粒构建
1.2.2 HEK293T细胞培养
1.2.3 质粒提取
1.2.4 筛选可激活ISRE的 ATG蛋白
1.2.5 ATG13 蛋白激活IFN-β产生实验
1.2.6 RNA提取
1.2.7 反转录
1.2.8 实时荧光定量PCR检测IFN-β及下游ISGs基因表达
1.2.9 免疫共沉淀分析ATG13 蛋白与RLRs信号通路中的互作蛋白
1.2.10 Western blot检测ATG13 蛋白、RIG-IN蛋白表达以及siRNA干扰效果
1.2.11 统计学分析
2 实验结果
2.1 ATG13 蛋白激活ISRE报告基因活性
2.2 ATG13 蛋白激活ISRE-luc呈剂量依赖型
2.3 ATG13 蛋白激活细胞RLRs信号通路
2.4 最佳ATG13 siRNA的筛选
2.5 敲低ATG13对IFN-β及下游ISGs产生的影响
2.6 免疫共沉淀分析ATG13 蛋白可以与RLRs信号通路中接头蛋白MAVS、TRAF3以及TRAF6 发生相互作用
3 分析与讨论
4 小结
第3章 ATG13 蛋白调控EMCV和 VSV复制
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 试剂及材料
1.1.2 病毒、细胞、质粒
1.1.3 设备
1.1.4 溶液配制
1.2 实验方法
1.2.1 细胞及病毒培养
1.2.2 TCID50 测定
1.2.3 病毒在HEK293T细胞中增值验证
1.2.4 病毒感染及外源干扰素对ATG13 基因转录的影响
1.2.5 ATG13 蛋白抑制病毒复制实验
1.2.6 表观抗病毒因子产生检测实验
1.2.7 外源干扰素抑制EMCV和 VSV复制
1.2.8 JAK I Inhibitor抑制JAK-STAT信号通路
1.2.9 RNA提取、反转录实验、实时荧光定量PCR检测
1.2.10 Western blot检测ATG13 蛋白
2 实验结果
2.1 EMCV和 VSV均可在HEK293T细胞中复制
2.2 病毒感染后诱导ATG13 基因转录
2.3 外源干扰素诱导ATG13 基因转录
2.4 过表达ATG13 蛋白抑制病毒复制
2.5 敲低ATG13 对病毒复制的影响
2.6 ATG13 蛋白激活的细胞因子对病毒复制的影响
2.7 外源干扰素对病毒复制影响
2.8 JAK-STAT信号通路对病毒复制影响
3 分析与讨论
4 小论
第4章 全文结论
参考文献
附录
作者简介
硕士期间参与的课题研究
硕士期间发表的论文
致谢
本文编号：3810529
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3810529.html
