布鲁氏菌019株弱化与pgm基因缺失株构建及初步免疫评价

发布时间：2023-05-07 07:54

　　布鲁氏菌病是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种人畜共患传染病,可引发病畜流产和睾丸炎,给畜牧业造成巨大的经济损失。目前许多国家对该病采取了相应的防控措施,如疫苗免疫、扑杀等,但收效甚微;弱毒疫苗免疫易感畜群,血清学检测通常呈阳性,不能与自然感染动物进行有效区分,不利于畜群的净化,同时某些疫苗仍具有一定的毒力,仍能引发孕畜的流产;布鲁氏菌019株是上世纪80年代在新疆本地分离的1株绵羊附睾种布鲁氏菌,以其为研究对象进行新型布鲁氏菌疫苗的研究具有重要的现实意义。目的:通过物理和化学的方法对布鲁氏菌019株进行诱导突变,分析生长状况及毒力的变化。同时针对布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶基因(pgm)定向构建布鲁氏菌019株pgm缺失株,并对其毒力及免疫效果进行评价;探讨布鲁氏菌019株致弱后作为疫苗株的潜力。方法:(1)布鲁氏菌019株分别采用吖啶橙(0.1g/L和0.05g/L)、苯酚(0.1g/L和0.05g/L)和紫外照射(5min和2min)处理,每组处理50次,测定各处理组细菌生长曲线及代时变化;腹腔注射小鼠测定脾脏指数和脾脏菌落形成单位(CFU);(2)分别以热灭活的布鲁氏菌019...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
英文缩略表
引言
第一章 文献综述 布鲁氏菌的研究进展
    1 布鲁氏菌主要毒力因子
    2 布鲁氏菌的致病与免疫机理
        2.1 布鲁氏菌的致病机制
        2.2 布鲁氏菌的免疫机制
    3 布鲁氏菌病的临床与诊断
        3.1 布鲁氏菌病的临床症状
        3.2 布鲁氏菌病的诊断
        3.3 布鲁氏菌病的防控
    4 布鲁氏菌疫苗
        4.1 布鲁氏菌灭活疫苗
        4.2 布鲁氏菌弱毒疫苗
        4.3 新型布鲁氏菌疫苗
第二章 实验部分
    实验一 布鲁氏菌019株弱化与毒力评价
        摘要
        1. 材料方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2. 结果
            2.1 生长能力变化比较
            2.2 小鼠脾脏指数的变化
            2.3 小鼠脾脏细菌计数
        3 讨论
    实验二 布鲁氏菌 019?pgm基因缺失株的构建
        摘要
        1 材料方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 pgm基因上、下游同源臂的扩增
            2.2 pgm基因上下游同源臂的融合
            2.3 SacB基因的扩增
            2.4 重组质粒酶切鉴定
            2.5 重组自杀载体ppS酶切鉴定
            2.6 布鲁氏菌 019Δpgm缺失株同源重组交换子的筛选
        3 讨论
    实验三 布鲁氏菌 019?pgm基因缺失株毒力及免疫效果的初步评价
        摘要
        1 材料方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 小鼠脾脏指数比较
            2.2 脾脏细菌计数
            2.3 小鼠体液免疫水平分析
            2.4 细胞免疫水平分析
        3 讨论
实验总结
创新点
参考文献
致谢
作者简介
导师评阅表



本文编号：3810595