Clathrin Heavy Chain 1在绵羊卵母细胞减数分裂成熟及早期胚胎发育过程中的作用

发布时间：2023-12-28 17:58

　　网格蛋白(Clathrin)不仅是通过囊泡运输来介导细胞内吞作用的胞质蛋白,而且在稳定微管蛋白和染色体排列中也具有重要作用。Clathrin是由三条重链和三条轻链组成的蛋白。网格重链蛋白1(Clathrin heavy chain 1,CLTC)是Clathrin其中的一条的重链,每条链的N-末端结构域可以与有丝分裂纺锤体结合。在本实验中,我们研究了CLTC在绵羊卵母细胞减数分裂成熟和早期胚胎发育中的功能。蛋白质免疫印迹表明,在绵羊卵母细胞成熟中CLTC蛋白维持高水平表达。尽管CLTC在生发泡(Germinal vesicle,GV)和生发泡破裂(Germinal vesicle breakdown,GVBD)阶段的细胞质中没有特异性定位,但CLTC在卵母细胞的中期Ⅰ(Metaphase Ⅰ,MⅠ)和中期Ⅱ(Metaphase Ⅱ,MⅡ)阶段定位于纺锤体区域。在绵羊卵母细胞成熟过程中,使用taxol、nocodazole和冷处理(cold treatment)来研究卵母细胞中CLTC和β-微管蛋白(β-tubulin,TUBB)之间的关系。我们发现药物和cold处理虽然没有影响CLTC...

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述 卵母细胞减数分裂纺锤体组装机制的研究进展
    1 卵母细胞减数分裂纺锤体微管起源
        1.1 RanGTP途径
        1.2 CPC途径
        1.3 Augmin途径
        1.4 其他成核途径
    2 卵母细胞减数分裂纺锤体微管组装
        2.1 纺锤体微管构成
        2.2 纺锤体双极化
        2.3 纺锤体极的形成
    3 局部mRNA的翻译在纺锤体形成中的作用
    4 展望
第二章 实验研究 Clathrin Heavy Chain1在绵羊卵母细胞减数分裂成熟及早期胚胎发育过程中的作用
    1 引言
    2 实验材料
        2.1 实验动物
        2.2 主要药品与试剂
        2.3 抗体
        2.4 主要仪器设备
        2.5 主要实验耗材
    3 实验方法
        3.1 绵羊卵母细胞的采集
        3.2 绵羊卵丘细胞的去除
        3.3 绵羊卵母细胞的孤雌激活
        3.4 早期胚胎的培养
        3.5 药物处理
        3.6 冷处理(cold treatment)
        3.7 CLTC morpholino(MO)显微注射
        3.8 免疫荧光染色
        3.9 免疫印迹(Western Blot)
        3.10 数据统计分析
    4 结果
        4.1 CLTC在绵羊卵母细胞减数分裂成熟和早期胚胎发育过程的表达与定位
            4.1.1 CLTC在绵羊卵母细胞减数分裂成熟中的表达
            4.1.2 CLTC在绵羊卵母细胞减数分裂成熟中的定位
            4.1.3 CLTC在绵羊早期胚胎发育过程中的表达定位
        4.2 使用药物破坏纺锤体结构后CLTC的定位和表达
            4.2.1 Nocodazole处理绵羊卵母细胞后对CLTC亚细胞定位和表达量的影响
            4.2.2 Taxol处理绵羊卵母细胞后对CLTC亚细胞定位和表达量的影响
        4.3 冷处理后和恢复后CLTC的表达和定位
        4.4 CLTC的敲减对绵羊卵母细胞减数分裂的影响
            4.4.1 CLTC MO的敲减效率验证
            4.4.2 CLTC MO敲减干扰了绵羊卵母细胞成熟
            4.4.3 CLTC MO敲减后导致卵母细胞纺锤体组装和染色体排列异常
        4.5 CLTC MO敲减干扰了绵羊早期胚胎发育
    5 讨论
    6 结论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3875906