猪肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、鉴定与感染HP-PRRSV实验

发布时间：2024-12-10 01:45

　　猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是有囊膜、单股正链RNA病毒，可以引起猪繁殖和呼吸系统障碍综合征（PRRS）。2006年，我国10多个省市的一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病，已经证实其主要病原是NSP2非连续性缺失30个氨基酸为特征的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV），该病迅速波及全国，严重危害养猪业，严重影响了人类健康和社会经济的发展。因此，对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染宿主致病机制的研究具有重要的意义。 猪是唯一能感染PRRSV的天然宿主，PRRSV对仔猪的损伤主要表现在呼吸系统，病毒也主要分布在免疫器官和肺，PRRSV感染的主要细胞为免疫系统的巨噬细胞、淋巴细胞。这些细胞越活跃，机体受到的攻击可能越严重。肺泡Ⅱ型上皮细胞（PAECⅡ）几乎为所有肺脏细胞始祖，作为肺泡上皮的“干细胞”。PRRSV也能引起严重的肺损伤。在正常的细胞更新及肺泡损伤修复过程中，发挥重要的作用。为了鉴定PRRSV导致的肺损伤与PAECⅡ损伤修复功能之间的关系，我们首先进行PAECⅡ的分离与纯化，后检测细胞内是否具有PRRSV感染所需受体。我们以HP-PR...

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【部分图文】：

图2-3：PAECII的透射电镜观察注：图A、B中标尺所示长度为1μm，图C中标尺所示长度为2μm，图D标尺所示长度为4μm

CD图2-3：PAECII的透射电镜观察注：图A、B中标尺所示长度为1μm，图C中标尺所示长度为2μm，图D标尺所示长度为4μm。Fig2-3PAECIIobservedwithtransmissionelectronmicroscopeNotes：A、B：....

图3-2PRRSV感染PAECⅡ后免疫荧光结果

3.4PRRSV感染PAECⅡ后间接免疫荧光结果在荧光显微镜下观察可看到0h时细胞未出现绿色荧光，12h和24h时出现绿色荧（图3-2），而因48h细胞破裂无法进行检测，这说明细胞内有PRRSVN蛋白表达，毒在细胞内成功感染复制。图3-1P....

图3-1PRRSV感染PAECII后不同时间点的形态观察，A：0h、B:12h、C：24h、D：CDAB

3.3.4PRRSV感染PAECⅡ后间接免疫荧光结果在荧光显微镜下观察可看到0h时细胞未出现绿色荧光，12h和24h时出现绿色荧光（图3-2），而因48h细胞破裂无法进行检测，这说明细胞内有PRRSVN蛋白表达，病毒在细胞内成功感染复制。图3....

图3-4：PRRSV感染PAECⅡ的PCR鉴定结果

CⅡ后PCR结果鉴定结果PCR扩增显示，感染后12,24,48h均在PRRSV的确感染了PAECⅡ型细胞，可以模型。1234M56bpECⅡ不同时间点总RNA提取M:DL2000plusPRRSV感染PAECⅡ后0,12,24,4....

本文编号：4015406