猪Coronin 1A基因在副猪嗜血杆菌感染过程中的功能研究

发布时间：2025-01-17 10:08

　　副猪嗜血杆菌是引起格拉泽氏病的病原体,该病严重地威胁着全世界范围内的猪群,给养猪业带来了巨大的经济损失,临诊上多表现为多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。众所周知,副猪嗜血杆菌只有抵抗了宿主肺脏的吞噬作用才能产生系统性疾病,而肺脏的第一个防御机制是猪肺泡巨噬细胞,它在清除风媒传播的病原体和其他环境微生物中发挥了重要作用。有趣的是,高毒力副猪嗜血杆菌能够阻止猪肺泡巨噬细胞的吞噬作用,然而低毒力菌株则被猪肺泡巨噬细胞吞噬并清除。最近有文献报道称副猪嗜血杆菌感染PK-15细胞能够激活NF-κB信号通路,其机制是促进IκB的降解和p65的磷酸化,继而刺激多种炎性因子的产生介导炎性应答。然而,副猪嗜血杆菌感染的致病机制还不甚清楚。 Coronin1A蛋白是哺乳动物coronin蛋白质家族的一员,也称为TACO或p57蛋白,主要表达于造血组织及细胞中,主要分布于细胞胞浆中。Coronin1A被认为在T淋巴细胞活化、迁移、存活和钙离子信号转导中发挥了重要作用。先前的文献报道称人源Coronin1A与致病性结核分枝杆菌在机体内存活有关,其中Coronin1A在结核分枝杆菌感染过程中主要参与调节吞噬小体与溶...

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摘要
Abstract
缩略语表
1. 文献综述
    1.1 副猪嗜血杆菌病
        1.1.1 病原学
        1.1.2 流行病学特征
        1.1.3 副猪嗜血杆菌诊断技术研究进展
        1.1.4 致病机理研究进展
    1.2 Coronin蛋白质家族
        1.2.1 Coronin蛋白质的家族成员、命名与表达模式
        1.2.2 Coronin蛋白质的定位与基本功能
        1.2.3 Coronin蛋白质发挥功能的生化机制研究进展
        1.2.4 Coronin 1A基因研究进展
2. 研究目的与意义
3. 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 菌种、质粒与细胞
        3.1.2 工具酶及主要试剂
        3.1.3 实验器材
        3.1.4 实验动物
        3.1.5 培养基与抗生素及其配制
        3.1.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制
        3.1.7 分子生物学分析软件
    3.2 实验方法
        3.2.1 猪Coronin 1A基因的克隆
        3.2.2 原核重组质粒的构建及测序
        3.2.3 猪Coronin 1A蛋白的表达、纯化与鉴定
        3.2.4 猪Coronin 1A蛋白的多克隆抗体制备
        3.2.5 Anti-Coronin 1A多克隆抗体的ELISA检测
        3.2.6 猪Coronin 1A在副猪嗜血杆菌(HPS)感染后的免疫组化分析
        3.2.7 Coronin 1A基因在猪重要组织及细胞系中的特异性分布
        3.2.8 LPS和Poly(I：C)刺激诱导PK-15细胞表达猪Coronin 1A基因
        3.2.9 真核质粒的构建与测序
        3.2.10 猪Coronin 1A基因在PK-15细胞中的亚细胞定位
        3.2.11 质粒瞬时转染(脂质体介导转染法)
        3.2.12 荧光素酶报告基因实验
        3.2.13 Western blot检测转染细胞中各蛋白的表达情况
        3.2.14 荧光定量PCR检测转染细胞中IL-6、IL-8和COX-2表达水平
        3.2.15 统计学方法
4. 结果和分析
    4.1 猪Coronin 1A基因克隆与序列分析
        4.1.1 猪Coronin 1A基因克隆
        4.1.2 猪Coronin 1A基因的序列分析
    4.2 猪Coronin 1A基因的真核表达质粒构建
    4.3 猪Coronin 1A基因在健康猪不同组织以及细胞系中的表达水平
    4.4 LPS和Poly(I：C)刺激PK-15细胞表达Coronin 1A基因
    4.5 猪Coronin 1A基因的亚细胞定位
    4.6 猪Coronin 1A蛋白的原核表达、纯化与Western blot鉴定分析
        4.6.1 猪Coronin 1A蛋白的原核表达与纯化
        4.6.2 猪Coronin 1A蛋白的Western blot鉴定分析
    4.7 猪Coronin 1A蛋白的抗血清效价测定
    4.8 感染副猪嗜血杆菌猪的重要组织中Coronin 1A表达水平
    4.9 感染副猪嗜血杆菌猪肺泡巨噬细胞中的Coronin 1A基因互作网络分析
    4.10 感染副猪嗜血杆菌猪肺泡巨噬细胞中的Coronin 1A亚细胞定位
    4.11 猪Coronin 1A基因与NF-κB相互作用的初步研究
        4.11.1 猪Coronin 1A抑制NF-κB途径
        4.11.2 猪Coronin 1A抑制IκBa的降解与p65的核转位
        4.11.3 猪Coronin 1A抑制NF-κB下游调控的促炎性因子表达
    4.12 猪Coronin 1A在副猪嗜血杆菌感染过程中调节NF-κB信号通路
5. 讨论
    5.1 猪Coronin 1A在副猪嗜血杆菌感染过程中可能与阻止吞噬溶酶体的形成有关
    5.2 猪Coronin 1A在副猪嗜血杆菌感染过程中调节NF-κB信号通路
6. 总结
参考文献
致谢



本文编号：4027929