粘菌素耐药基因mcr-1阳性猪源大肠杆菌耐药特性分析

发布时间：2025-02-07 19:59

　　近年来,抗菌药物常被作为食品动物的添加剂或临床药物治疗使用,导致猪源大肠杆菌的耐药性问题愈加严重,特别是多重耐药菌株的出现,使得多年来被弃用的具有肾毒性作用的粘菌素重新回归临床使用。但这一现状并未维持很久,粘菌素这道防线于2015年被细菌成功攻破。本研究对2015-2016年从七省（安徽、河南、湖南、湖北、江西、山西、陕西）采集的病料样本进行大肠杆菌分离鉴定,采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行八大类13种抗菌药物的敏感性试验,并对其携带耐药基因进行PCR检测及测序分析;采用ERIC分型、多位点序列分型（MLST）和质粒接合试验方法,对mcr-1阳性菌株的克隆和水平传播进行分析;对mcr-1阳性重点接合菌株进行质粒全序列测序,分析mcr-1质粒分子特性,对mcr-1的传播控制提供依据。猪大肠杆菌中mcr-1的阳性检出率为25.5%（78/306）,其中从病猪体内分离的102株大肠杆菌中检测出46株阳性,占比45.1%,从健康猪体内分离的204株大肠杆菌中检测出32株阳性,占比15.7%（P=0.000）。同时,前者对粘菌素、头孢噻呋、头孢喹肟、庆大霉素、阿米卡星、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
1 文献综述
    1.1 猪源大肠杆菌耐药现状与耐药基因的流行传播
        1.1.1 猪源大肠杆菌耐药现状
        1.1.2 猪源大肠杆菌耐药基因的流行传播
    1.2 猪源大肠杆菌对粘菌素耐药现状
    1.3 mcr-1的流行概况
        1.3.1 动物或动物源食品中mcr-1的流行现状
        1.3.2 人源及环境中mcr-1的流行现状
    1.4 细菌对粘菌素耐药机制
    1.5 mcr-1的传播机制
        1.5.1 质粒介导mcr-1传播
        1.5.2 插入序列ISApl1
    1.6 本研究的目的与意义
试验一河南等七省猪源大肠杆菌分离及mcr-1的检测与流行分析
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 菌株
            2.1.2 试验药品及配制
            2.1.3 培养基
            2.1.4 试验试剂
            2.1.5 试验仪器
        2.2 方法
            2.2.1 细菌分离与鉴定
            2.2.2 药敏试验
            2.2.3 DNA的提取
            2.2.4 PCR扩增及测序
            2.2.5 统计分析
    3 结果与分析
        3.1 大肠杆菌分离鉴定结果分析
        3.2 药敏试验结果与分析
        3.3 患病猪和健康猪源大肠杆菌耐药表型对比分析
        3.4 mcr-1的流行
        3.5 携带和不携带mcr-1的大肠杆菌耐药谱对比分析
    4 讨论
        4.1 猪源大肠杆菌的分离特性
        4.2 大肠杆菌多重耐药分析
        4.3 mcr-1基因流行情况及耐药差异分析
    5 结论
试验二 猪源大肠杆菌耐药基因的检测与分析
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 模板DNA的提取
            2.1.2 试验试剂
        2.2 方法
            2.2.1 DNA模板的提取
            2.2.2 PCR扩增及测序
            2.2.3 β-内酰胺类耐药基因引物及参考文献
            2.2.6 氨基糖苷类耐药基因引物
            2.2.4 四环素类、酰胺醇类和磺胺类耐药基因引物及参考文献
            2.2.5 喹诺酮类、多药外排泵类耐药基因引物及参考文献
    3 结果与分析
        3.1 ESBLs耐药基因检测结果与分析
        3.2 氨基糖苷类耐药基因检测结果与分析
        3.3 四环素类、酰胺醇类和磺胺类耐药基因检测结果与分析
        3.4 喹诺酮类、多药外排泵类耐药基因检测结果与分析
    4 讨论
    5 结论
试验三 mcr-1的快速散播机制
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 菌株
            2.1.2 试验药品及配制
            2.1.3 培养基
            2.1.4 试验试剂
            2.1.5 试验仪器
        2.2 方法
            2.2.1 药敏试验
            2.2.2 DNA的提取
            2.2.3 mcr-1基因的检测
            2.2.4 ERIC-PCR分型
            2.2.5 mcr-1阳性菌株MLST分型
            2.2.6 mcr-1阳性菌接合试验
            2.2.7 携带mcr-1基因的质粒测序
    3 结果与分析
        3.1 药敏结果
        3.2 mcr-1阳性株ERIC分型结果
        3.3 mcr-1阳性菌株MLST分型结果
        3.4 质粒接合结果
        3.5 质粒测序结果
    4 讨论
    5 结论
全文结论
参考文献
英文摘要
附录一 ：缩略词表



本文编号：4031223