产气荚膜梭菌α-β2-ε-β1毒素融合基因在干酪乳杆菌中的表达及其免疫原性分析

发布时间：2025-02-09 17:32

　　产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是创伤性气性坏疽和人类食物中毒以及动物坏死性肠炎、肠毒血症的主要病原菌之一。产气荚膜梭菌主要的致病因子是其分泌的外毒素,种类多达13种,其中α、β、ε和t是最主要的外毒素,根据产生外毒素的种类不同,可分为A、B、C、D和E5个血清型,其中α毒素(C. perfringens alpha toxin, CPA)是各型产气荚膜梭菌产生的共同毒力因子,也是A型菌产生的最主要毒素,不仅能破坏细胞膜的完整性,导致细胞裂解,而且具有细胞毒性、溶血性、致死性和皮肤坏死性等特性。β2毒素(C.perfringens beta2toxin, cpb2),是由B型和C型菌产生的一种强毒素,作为C型产气荚膜梭菌主要毒力因子之一,具有细胞毒性和致死性,可产生溶血性坏死和坏死性肠炎,该型病菌可引发多种畜禽的肠炎和肠毒血症。ε毒素由B型和D型产气荚膜梭菌产生的毒素,是D型菌的主要毒素。β1毒素是一种坏死性和致死性毒素,它们是引起仔猪红痢的主要致病因子,该病具有很高的发病率和死亡率。为有效预防由多型产气荚膜梭菌所引起的疾病,制备多种毒素的免疫原,抵抗异源毒...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 产气荚膜梭菌感染及病原学研究进展
        1.1.1 产气荚膜梭菌致病机制
    1.2 产气荚膜梭菌分类及其引起的相关疾病
    1.3 产气荚膜梭菌疫苗的研究进展
        1.3.1 a毒素疫苗的研究进展
        1.3.2 β毒素疫苗的研究进展
        1.3.3 ε毒素疫苗的研究进展
    1.4 乳酸菌作为疫苗载体的研究进展
        1.4.1 乳酸杆菌作为黏膜免疫活载体疫苗的优势
        1.4.2 重组乳酸杆菌作为活载体疫苗的研究进展
        1.4.3 乳酸菌口服疫苗的展望
    1.5 研究目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 质粒和菌种
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 引物合成
        2.1.4 试剂
        2.1.5 血清
        2.1.6 主要实验仪器与设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 表达产气荚膜梭菌α-β2-ε-β1毒素融合基因重组大肠杆菌的构建
        2.2.2 重组大肠杆菌的诱导表达及鉴定
        2.2.3 表达产气荚膜梭菌α-β2-ε-β1毒素融合基因重组干酪乳杆菌的构建及鉴定
        2.2.4 重组干酪乳杆菌的诱导表达及鉴定
        2.2.5 口服重组干酪乳杆菌特异性抗体的测定
        2.2.6 毒素中和试验
3 实验结果
    3.1 目的基因α-β2,ε,β1的PCR扩增结果
    3.2 重组菌表达载体的鉴定
        3.2.1 大肠杆菌重组表达载体pProHTa-α-β2-ε-β1鉴定结果
        3.2.2 干酪乳杆菌重组载体pPG-2-α-β2-ε-β1的鉴定结果
    3.3 重组大肠杆菌的诱导表达鉴定结果
        3.3.1 SDS-PAGE结果
        3.3.2 Western blot鉴定
    3.4 重组干酪乳杆菌的诱导表达鉴定结果
        3.4.1 Western blot鉴定结果
    3.5 重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠特异性抗体检测结果
        3.5.1 小鼠粪便特异性sIgA检测结果
        3.5.2 小鼠血清中特异性IgG检测结果
        3.5.3 免疫小鼠泪液、阴道黏液中特异性sIgA测定结果
    3.6 攻毒保护性试验结果
        3.6.1 毒素毒力的测定结果
        3.6.2 攻毒试验结果
    3.7 血清抗体中和效力的测定结果
4 讨论
    4.1 以α-β2-ε-β1毒素为免疫原构建重组乳酸杆菌的设计思路
    4.2 分泌型干酪乳杆菌作为递呈抗原载体的优势
    4.3 口服重组干酪乳杆菌的免疫效果分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：4032608