CIDEC互作蛋白的筛选与分析

发布时间：2017-07-27 13:35

  本文关键词：CIDEC互作蛋白的筛选与分析

  更多相关文章： 猪肉品质 脂肪沉积 CIDEC 互作蛋白 质谱

【摘要】：猪肉品质是猪的重要经济性状,也是猪的性能测定中的一重要指标。随着人们生活水平的提高,猪的肉质性状也从刚开始一味追求瘦肉率到现在更注重肉质品质。肌内脂肪含量是影响肉质的一个极其重要的指标,肝脏脂肪代谢的能力影响其沉积水平。诱导细胞凋亡FF45样效应因子C(Cell death-inducing DFF45-like effector c, cidec),在鼠中称为脂肪特异性因子(Fat-specific protein of 27kD, FSP27)与脂肪沉积相关,在脂肪代谢中起着重要作用。由于猪CIDEC与小鼠的CIDEC有高度的同源性(82.8%),本研究第一阶段先以小鼠为研究对象,采用RT-PCR, Co-IP,质谱分析等方法,筛选在禁食、高脂对照条件下的肝脏以及对照条件下的脂肪中CIDEC的互作蛋白。获得如下结果：1.在脂肪沉积(高脂喂养)和脂肪动员(禁食处理)这一对相反的进程中,肝脏CIDEC的表达量与甘油三酯(TG)的含量均显著上升,因此推测CIDEC可能是在脂肪沉积和动员中的关键因子。2.利用Co-IP技术捕获CIDEC在高脂,禁食,对照的肝脏和对照的脂肪组织中的互作蛋白。并进行质谱筛选,通过DAVID网站对互作蛋白进行蛋白功能,亚细胞定位,GO, KEGG功能及其富集度等方面的分析。发现在不同营养和不同组织条件下,CIDEC发生转位。本研究第二阶段以巴马猪为实验对象,试图验证CIDEC互作蛋白在猪中是否成立。根据质谱分析的结果,挑选出八个差异显著的互作蛋白并构建表达载体,为下一步采用酵母双杂交方法验证做准备。
【关键词】：猪肉品质 脂肪沉积 CIDEC 互作蛋白 质谱
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 缩略语表11-13
• 第一章 前言13-24
• 1.1 猪肉质性状概述13-14
• 1.1.1 研究猪肉质性状的意义13
• 1.1.2 研究猪种的优势13
• 1.1.3 肉质性状的判定标准13-14
• 1.1.4 影响猪肉质性状的因素14
• 1.2 Fsp27简介14-19
• 1.2.1 cidec/Fsp27的发现及同源性分析14-16
• 1.2.2 cidec/Fsp27参与脂滴的形成与发展16-17
• 1.2.3 cidec/Fsp27家族蛋白在脂肪代谢中的功能17-18
• 1.2.4 cidec/Fsp27在肝脏中的功能18-19
• 1.3 免疫共沉淀19-20
• 1.4 质谱介绍与数据分析20-21
• 1.4.1 质谱介绍20
• 1.4.2 基因注释分析20-21
• 1.4.3 基因集功能富集分析21
• 1.5 酵母双杂交载体的构建21-22
• 1.6 研究的目的和意义22-24
• 第二章 材料与方法24-45
• 2.1 实验材料24
• 2.1.1 实验动物饲喂及采样24
• 2.1.2 载体与菌株24
• 2.2 主要仪器、试剂和溶液的配制方法24-28
• 2.2.1 主要仪器及厂家24-26
• 2.2.2 主要试剂26
• 2.2.3 主要溶液的配制方法26-28
• 2.3 实验方法28-45
• 2.3.1 实时定量PCR28-30
• 2.3.2 试剂盒使用30-31
• 2.3.3 免疫共沉淀31-32
• 2.3.4 聚丙烯凝胶电泳32-33
• 2.3.5 银染33-34
• 2.3.6 质谱分析34
• 2.3.7 载体构建的引物设计34-35
• 2.3.8 PCR扩增体系35-36
• 2.3.9 琼脂糖凝胶电泳检测36-37
• 2.3.10 PCR目的产物的回收与纯化37
• 2.3.11 平末端PCR产物3’端加“A”尾37-38
• 2.3.12 目的片段与T载体的连接38
• 2.3.13 大肠杆菌DH5α感受态的制备与转化38-39
• 2.3.14 重组质粒的筛选与鉴定39
• 2.3.15 重组质粒的抽提39-40
• 2.3.16 重组质粒的双酶切40-43
• 2.3.17 目的片段与表达载体连接43-44
• 2.3.18 生物分析相关软件或网站44-45
• 第三章 结果与分析45-66
• 3.1 小鼠的饲喂情况45
• 3.2 禁食与高脂情况对肝脏和脂肪组织cidec表达量的影响45-46
• 3.3 禁食与高脂情况下对肝脏TG(Triglyceride)含量的影响46-47
• 3.4 免疫共沉淀获取CIDEC互作蛋白47-49
• 3.5 质谱结果分析49-63
• 3.5.1 同一组织不同营养状态下CIDEC互作蛋白的分析49-59
• 3.5.2 不同组织在同一营养状态下CIDEC互作蛋白分析59-63
• 3.6 载体的构建63-66
• 第四章 讨论与展望66-69
• 4.1 讨论66-68
• 4.2 展望68-69
• 参考文献69-74
• 致谢74-75
• 攻读学位期间发表论文情况75

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2 解庆柱;杜玉诗;;维生素对猪肉品质的影响[A];2007山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2007年

3 王淼;周楠;温洁霞;谢南;孙杰;仲飞;郑世学;;劣质肉的形成机理以及对猪肉品质的改进措施[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年

4 解庆柱;郭建凤;;维生素E对猪肉品质的影响[A];2006山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2006年

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1 记者　郭云飞;“南参畜宝”提高猪肉品质[N];湖南日报;2006年

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本文编号：581713