荷斯坦奶牛CXCL8基因SNPs检测及其与乳房炎和产奶性状的关联分析
本文关键词:荷斯坦奶牛CXCL8基因SNPs检测及其与乳房炎和产奶性状的关联分析
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【摘要】:白介素8(interkeukin8,IL8)作为一种中性粒细胞趋化因子是趋化因子大家族的一员。曾有试验CXCL8在乳腺炎患者的血清中的分泌量高于健康对照者的血清分泌量。CXCL8的研究主要集中在人类的乳腺癌上,本试验以CXCL8基因作为影响奶牛生产性状及乳房炎的候选基因,探索其与奶牛的生产性能及乳房炎的相关性。本研究先利用DNAMAN软件、在线软件Ex PASy及在线软件PSORT II Prediction等生物软件对奶牛CXCL8基因进行生物信息学分析。提取446份经产奶牛的颈静脉血样中的DNA,用PCR技术扩增目的基因,使用直接测序检测该基因中的多态位点。采用PCR-RFLP和四引物法技术对多态性位点进行基因分型,最后与荷斯坦奶牛乳腺炎和产奶性状进行关联分析,旨在筛查与奶牛多种产奶性状及乳房炎相关的多态位点,为对于中国荷斯坦奶牛种质资源选育和高效养殖提供遗传基础。本次测试的主要结果如下:1.CXCL8基因的生物信息学分析对CXCL8进行奶牛、绵羊、猪、家犬、兔子、人和野马之间的核苷酸同源性分析,得出奶牛的CXCL8和绵羊、猪之间的同源性在90%以上,说明该基因在奶牛,猪,绵羊这三个物种间有很高的保守性。对奶牛CXCL8基因编码的蛋白质进行结构和功能预测,结果表明CXCL8蛋白为亲水性蛋白,在细胞内质网有少量存在。2.CXCL8基因遗传变异检测本研究对CXCL8基因进行测序检测,最终检测到4个SNPs位点。CXCL8基因的C202T、C264T、A302G和A2471G均位于内含子区。3.CXCL8基因群体遗传学分析对CXCL8基因进行群体遗传学分析发现,其中三个SNP位点C202T、C264T和A302G均处于中度多态,只有A2471G位点为低度多态。CXCL8基因的C202T、A302G两个突变位点均处于Hard-Weinberg平衡(P0.05),C264T、A2471G两个突变位点均不处于Hard-Weinberg平衡(P0.05)。4.CXCL8基因与奶牛的生产性状及乳房炎的关联分析利用SPSS 20.0进行最小二乘均值分析表明CXCL8基因A2471G位点与奶牛的乳脂率显著相关(P0.05),AG基因型具有较低的乳脂率。中国荷斯坦奶牛CXCL8基因的生物信息学分析、多态位点检测及其与产奶性状和乳房炎的关联分析,为进一步研究CXCL8基因的生物学功能提供了理论依据,为了解其在乳房炎抗性中的作用机理提供一定的理论基础。
【关键词】:CXCL8 荷斯坦奶牛 乳房炎 SNPs 关联分析
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S823;S858.23
【目录】:
- 摘要6-8
- ABSTRACT8-12
- 第一章 综述12-22
- 1.1 奶牛乳房炎12
- 1.2 乳房炎的分类12-14
- 1.2.1 隐性乳房炎12-13
- 1.2.2 临床性乳房炎13
- 1.2.3 慢性乳房炎13-14
- 1.3 SNP概述14-17
- 1.3.1 SNP概念14
- 1.3.2 SNP主要检测方法14-17
- 1.4 CXCL8简介及研究现状17-21
- 1.4.1 白介素17-18
- 1.4.2 白介素8及其研究现状18-21
- 1.5 研究目的及意义21-22
- 第二章 CXCL8基因的生物信息学分析22-27
- 2.1 材料与方法22-23
- 2.1.1 材料22
- 2.1.2 试验方法22-23
- 2.2 结果与分析23-26
- 2.2.1 奶牛CXCL8基因序列相似性比较23
- 2.2.2 奶牛CXCL8基因的系统进化树分析23-24
- 2.2.3 奶牛CXCL8蛋白理化性质分析24-25
- 2.2.4 奶牛CXCL8蛋白的亚细胞定位25
- 2.2.5 奶牛CXCL8蛋白的结构域分析25-26
- 2.3 小结26-27
- 第三章 CXCL8基因遗传变异检测及其与乳房炎和产奶性状的关联分析27-37
- 3.1 试验材料27-28
- 3.1.1 奶牛血样采集27
- 3.1.2 仪器和设备27
- 3.1.3 药品和试剂27-28
- 3.2 试验步骤28-30
- 3.2.1 血样采集28
- 3.2.2 血样中DNA的提取28
- 3.2.3. 提取的血样DNA检测28
- 3.2.4 引物的设计28-29
- 3.2.5 PCR扩增、测序与酶切,,四引物检测29-30
- 3.3 试验结果30-33
- 3.3.1 CXCL8基因SNP位点检测30-32
- 3.3.2 CXCL8基因SNP位点分型32-33
- 3.3.3 CXCL8基因SNP位点分布33
- 3.4 结果分析33-35
- 3.4.1 CXCL8基因的群体遗传学分析33-34
- 3.4.2 CXCL8基因多态性与产奶性状、乳房炎的关联分析34-35
- 3.5 CXCL8基因在荷斯坦奶牛分子育种中的应用理论35-36
- 3.5.1 荷斯坦奶牛生产性状相关的CXCL8基因标记理论研究方案35
- 3.5.2 荷斯坦奶牛的本品种选育35-36
- 3.6 讨论36
- 3.7 小结36-37
- 结论与创新点37-38
- 参考文献38-44
- 附录44-51
- 致谢51-52
- 作者简介52
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