鸡ERα基因胚胎组织表达差异及其启动子活性分析

发布时间：2017-08-12 06:30

  本文关键词：鸡ERα基因胚胎组织表达差异及其启动子活性分析

  更多相关文章： 鸡 ERα基因 剪切体 启动子

【摘要】：禽类作为研究其他脊椎动物的重要模式生物,其性别分化和性腺发育的相关研究一直是发育生物学的研究热点。性激素在性别分化和性腺发育方面起到了重要的作用,有研究表明雌激素合成的关键酶芳香化酶可以导致雄性鸡胚的雌性化,这说明雌激素在鸡胚早期性腺发育中起到重要作用。鸡雌激素受体cERα基因有五个启动子,分别启动转录形成多个5’UTR不同的c ERαmRNA剪切体,本研究拟对鸡胚胎期cERα基因的多个剪切体进行研究,用实时荧光量PCR的方法对cERα基因多个剪切体在鸡胚五个时期八个组织中的表达情况进行检测,实验结果表明cERα基因的B、C、D三种剪切体在鸡胚五个时期(E10.5、E12.5、E14.5、E16.5、E18.5)八个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑泡、肌肉、性腺)中均有表达,在性腺中表达量最高,且在雌雄两性中呈现表达差异,均为雌性表达量高于雄性;根据cERα基因的B、C、D三种剪切体均在性腺中高表达的实验结果,进一步对三种剪切体在性腺中的相对表达情况进行了定量检测,发现三种剪切体在不同时期性腺中的相对表达趋势基本一致,且雌性均在E14.5时表达量下调,三种剪切体的相对表达水平表现为CDB;同时使用双荧光素酶报告基因系统的方法在CEF、DF1和PK15三种细胞系中对六个启动子(A1、A2、A12、B、C、D)重组载体进行了活性检测,结果发现在CEF、DF1细胞中均检测到了启动子活性,PK15细胞中没有检测到启动子活性。CEF细胞中启动子重组载体相对活性表现为DBCA12A1A2,DF1细胞中相对活性为DA12A2CBA1,其中D启动子的活性均远高于其他几个启动子,启动子重组载体A12(包含启动子A1和A2)的活性均大于单独的启动子A1和A2,推测启动子A1和A2之间存在互作。
【关键词】：鸡 ERα基因 剪切体 启动子
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 缩略词表10-11
• 1 前言11-21
• 1.1 研究问题的由来11-12
• 1.2 鸡的性别决定及性分化机制12-14
• 1.2.1 性别决定假说12-13
• 1.2.2 性腺的发育过程13-14
• 1.3 雌激素与性别分化14-16
• 1.3.1 雌激素14-15
• 1.3.2 ERα 基因15-16
• 1.4 ERα 基因的选择性剪切16-20
• 1.4.1 选择性剪切16-18
• 1.4.2 ERα 的选择性剪切18-20
• 1.5 研究目的与意义20-21
• 2 材料与方法21-35
• 2.1 材料21-24
• 2.1.1 主要载体和细胞系21
• 2.1.2 主要试剂及溶液的配制21-23
• 2.1.3 主要仪器23
• 2.1.4 生物信息学分析相关软件和数据库23-24
• 2.2 方法24-35
• 2.2.1 实时荧光定量PCR检测24-25
• 2.2.2 双荧光素酶基因报告载体检测ERα 基因启动子的活性25-31
• 2.2.3 细胞培养及质粒转染31-35
• 3 结果35-48
• 3.1 ERα 基因不同剪切体表达情况的检测35-45
• 3.1.1 B剪切体在不同时期各组织中的相对表达量35-38
• 3.1.2 C剪切体在不同时期各组织中的相对表达量38-41
• 3.1.3 D剪切体在不同时期各组织中的相对表达量41-44
• 3.1.4 B、C、D三种剪切体在不同时期性腺中的相对表达量44-45
• 3.2 ERα 基因不同启动子活性检测45-48
• 3.2.1 双荧光素酶报告基因重组载体的构建45-46
• 3.2.2 双荧光素酶活性的检测46-48
• 4 讨论48-52
• 4.1 ERα 基因剪切体在不同时期各组织中具有不同的表达水平48-50
• 4.2 ERα 基因启动子在不同细胞中具有不同的活性50-52
• 5 小结52-53
• 5.1 本研究所取得的结果52
• 5.2 下一步需要研究的问题52-53
• 参考文献53-60
• 致谢60-61

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本文编号：660207