新霉素人工抗原的制备及鉴定

发布时间：2017-10-10 15:11

  本文关键词：新霉素人工抗原的制备及鉴定

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【摘要】：新霉素(neomycin, NEO)是一种氨基糖苷类抗生素(aminoglycosides),因其具有高效、广谱的抗菌作用,广泛应用于医药和兽药领域。新霉素虽然是重要的抗感染类药物,但因其对人和动物存在潜在的肾毒性和耳毒性等毒副作用,危害人体健康,使动物源性食品安全受到威胁,而被多个国家禁止和限制使用。所以建立新霉素残留的快速检测方法十分必要。 国内外对新霉素残留的检测方法主要有理化方法、微生物法和免疫学分析方法。酶联免疫吸附测定方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)因其具有快速、简便、灵敏、特异等优点,在兽药残留检测的领域得到了较为广泛的应用,发展迅速。 本研究旨在制备出具有良好免疫原性的新霉素人工抗原,对其进行鉴定及免疫效果评价。由于新霉素为小分子半抗原,不具备免疫原性,应用蛋白质连接技术,将新霉素与牛血清白蛋白(bovine serum aibumin, BSA)、卵清蛋白(ovaibumin, OVA)进行偶联,制备出新霉素人工抗原NEO-BSA及NEO-OVA,用紫外光谱分析法测定其蛋白质浓度,用红外光谱分析法(IR)、SDS-PAGE电泳法对其质量进行初步鉴定；用NEO-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定多抗上清(pAb)抗体效价,阻断ELISA法鉴定pAb敏感性,交叉反应试验鉴定pAb特异性,综合评价新霉素人工抗原的免疫效果。 实验数据表明：测定偶联产物NEO-BSA、 NEO-OVA的蛋白浓度分别为6.344、4.122mg/ml; NEO-BSA的红外光谱结果与BSA相比,发生了相对明显的改变,NEO-BSA的电泳条带与BSA的相比,NEO-BSA相对滞后,并出现了明显的拖尾现象,表明新霉素人工抗原制备成功。用NEO-BSA免疫小鼠,获得的pAb效价为1：3200,半数抑制浓度为105μg/ml,该pAb只与新霉素有强特异性反应,与链霉素、卡那霉素、庆大霉素的交叉反应率均小于0.5%,与沙丁胺醇、土霉素交叉反应率均小于0.1%。本研究制备出了具有良好免疫原性的新霉素人工抗原,为进一步制备高亲和力抗新霉素单克隆抗体,建立新霉素残留的免疫学检测方法,研制新霉素快速诊断试剂奠定了基础。
【关键词】：新霉素 人工抗原 ELISA 合成 鉴定
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：TQ465;R392
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 英文缩写一览表9-12
• 1 文献综述12-28
• 1.1 食品中的兽药残留问题12-16
• 1.1.1 兽药残留现状12-13
• 1.1.2 兽药残留原因13
• 1.1.3 兽药残留危害13-15
• 1.1.4 国内外对兽药残留的监控15-16
• 1.2 氨基糖苷类抗生素简介16-19
• 1.3 新霉素19-23
• 1.3.1 新霉素简介19-20
• 1.3.2 新霉素的残留及危害20-21
• 1.3.3 新霉素残留的检测方法21-23
• 1.4 酶联免疫吸附法简介23-24
• 1.4.1 基本原理23
• 1.4.2 ELISA主要类型23-24
• 1.5 新霉素人工抗原制备的理论基础24-26
• 1.5.1 载体蛋白的选择25
• 1.5.2 新霉素人工抗原制备的常用方法25-26
• 1.5.3 偶联条件26
• 1.6 本课题研究目的及意义26-27
• 1.7 本课题研究内容27-28
• 2 材料与方法28-38
• 2.1 实验材料及试剂28-29
• 2.2 实验仪器及设备29-30
• 2.3 实验动物30
• 2.4 常用溶液的配制30-34
• 2.5 实验方法34-38
• 2.5.1 新霉素人工抗原的制备34
• 2.5.2 新霉素人工抗原的鉴定34-35
• 2.5.3 新霉素多抗血清(pAb)鉴定35-38
• 3 结果与讨论38-45
• 3.1 结果38-43
• 3.1.1 偶联产物浓度的测定38
• 3.1.2 新霉素人工抗原的鉴定38-39
• 3.1.3 新霉素多抗血清(pAb)鉴定39-43
• 3.2 讨论43-45
• 3.2.1 新霉素人工抗原的制备43
• 3.2.2 新霉素人工抗原的鉴定43-45
• 4 结论45-46
• 5 展望46-47
• 参考文献47-51
• 致谢51-52
• 作者简介52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 何方洋;;兽药残留检测技术研究[J];北京工商大学学报(自然科学版);2012年01期

2 吴晓丰,杨鹭花;氯霉素残留的危害及其检测方法[J];动物医学进展;2004年03期

3 冯学慧;黄素珍;杨国胜;;浅析动物产品兽药残留的危害与对策[J];动物医学进展;2010年S1期

4 郑卫;氨基糖苷类抗生素研究的新进展[J];国外医药(抗生素分册);2005年03期

5 陈敏艳;王香敏;朱弘;谭学超;郭抗抗;;畜禽产品兽药残留危害现状与分析[J];动物医学进展;2012年09期

6 张光辉;解金辉;张宜娜;陈静;刘亚东;李伟;;兽药残留对生态环境的危害及对策研究[J];江苏农业科学;2011年06期

7 马艳梅;动物性食品兽药残留及其控制措施[J];江西畜牧兽医杂志;2005年01期

8 李爱师;动物性食品中兽药残留问题[J];解放军预防医学杂志;1997年03期

9 田颖;李玉文;;兽药残留及其分析技术研究进展[J];现代畜牧兽医;2005年12期

10 杨利国,谢成侠,沈家森,程瑞禾,孙卫国;孕酮酶免疫测定试剂盒的研制及其在家畜繁殖上的应用[J];南京农业大学学报;1988年04期

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 徐乃丰;新霉素ELISA方法的建立[D];江南大学;2010年

2 李琳;国内外动物源性食品中兽药最高残留限量标准的对比研究[D];中国农业大学;2005年

3 徐蓓;食品中新霉素兽药残留酶联免疫检测方法研究[D];天津科技大学;2008年

4 秦占国;国内外兽药残留与动物源食品安全管理研究[D];华中农业大学;2009年

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本文编号：1007054