STAT3-TLR2信号轴在沙眼衣原体持续感染中的作用初探

发布时间：2017-10-10 17:41

  本文关键词：STAT3-TLR2信号轴在沙眼衣原体持续感染中的作用初探

  更多相关文章： 持续性感染 干扰素-γ 沙眼衣原体 STAT3 TLR2 IL-6

【摘要】：目的：沙眼衣原体是最常见的性传播性疾病的病原体,炎症反应是沙眼衣原体感染的主要病理特点。在沙眼衣原体持续性感染状态下,可能存在着STAT3-TLR2正反馈调节轴,介导炎性细胞因子的异常分泌。因此,我们拟通过研究STAT3-TLR2信号轴在沙眼衣原体持续感染细胞中的作用,探索炎性细胞因子异常分泌的分子机制,为防治衣原体的感染提供理论及实验依据。 方法：以HeLa细胞为研究对象建立沙眼衣原体的急性感染和IFN-γ诱导的持续感染模型。采用RNAi技术在HeLa细胞中沉默STAT3基因,通过药物筛选构建稳定表达细胞系,在此细胞系中建立相应的沙眼衣原体感染模型。采用qRT-PCR、western blo、ELISA等方法比较不同感染状态下,HeLa细胞STAT3-TLR2信号轴相关分子的蛋白表达和活化水平以及炎性细胞因子的分泌水平。 结果：在沙眼衣原体持续性感染状态下,上皮细胞分泌的IL-6、IL-1α以及STAT3和TLR2的表达量均明显增加,IL-6的分泌、STAT3蛋白表达与活化和TLR2表达水平呈一致性的升高。干扰靶细胞STAT3基因表达后,沙眼衣原体持续性感染状态下的IL-6和IL-1α分泌水平以及TLR2蛋白表达水平均明显的降低,并且IL-6和IL-1α分泌降低水平与STAT3的干扰效果显著相关。 结论：1、在IFN-γ诱导的沙眼衣原体持续感染状态下,炎性细胞因子IL-6、IL-1α的分泌以及STAT3、TLR2的表达明显增加。 2、在沙眼衣原体持续感染状态下,STAT3在炎性细胞因子IL-6和IL-1α的异常分泌中起关键作用。 3、在沙眼衣原体持续感染状态下,存在着STAT3-TLR2信号轴的活化。
【关键词】：持续性感染 干扰素-γ 沙眼衣原体 STAT3 TLR2 IL-6
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392.9
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 目录8-10
• ~.写词10-11
• 前言11-15
• 第一章 沙眼衣原体持续感染状态下STAT3-TLR2信号轴的活化15-29
• 1. 前言15-16
• 2 材料16-17
• 2.1 细胞16
• 2.2 菌株16
• 2.3 主要试剂和试剂盒16
• 2.4 主要仪器与设备16-17
• 3. 方法17-22
• 3.1 细胞培养17
• 3.2 Ct的感染和增殖17
• 3.3 Ct的滴度测定17
• 3.4 吉姆萨染色17
• 3.5 建立Ct不同感染模型17-18
• 3.6 qRT-PCR检测基因的转录18-19
• 3.7 ELISA检测细胞因子的分泌19-20
• 3.8 Western blot检测蛋白的表达20-21
• 3.9 统计分析21-22
• 4. 结果22-26
• 4.1 采用低浓度IFN-γ刺激建立Ct持续感染的HeLa细胞模型22
• 4.2 Ct持续感染状态下TLR2、IL-6和STAT3的表达升高22-23
• 4.3 Ct持续感染状态下TLR2的表达增加23-24
• 4.4 Ct持续感染状态下IL-6、IL-1α的分泌升高24
• 4.5 Ct持续感染状态下STAT3的表达与活化增加24-26
• 5 讨论26-28
• 6 结论28-29
• 第二章 STAT3对沙眼衣原体持续感染状态下STAT3-TLR2信号轴的影响29-40
• 1 前言29-30
• 2 材料30-31
• 2.1 细胞30
• 2.2 菌株30
• 2.3 试剂和试剂盒30-31
• 3. 方法31-34
• 3.1 质粒转化31
• 3.2 质粒抽提31-32
• 3.3 重组质粒的鉴定32
• 3.4 STAT3基因沉默稳定HeLa细胞系的鉴定32
• 3.5 利用稳定干扰HeLa细胞建立不同Ct感染模型32-33
• 3.6 免疫印迹技术检测STAT3基因沉默后TLR2的表达33
• 3.7 ELISA检测STAT3基因沉默后IL-6和IL-1α的分泌33
• 3.8 统计分析33-34
• 4 结果34-37
• 4.1 STAT3干扰慢病毒载体测序结果34
• 4.2 慢病毒转染HeLa细胞的转染效率34
• 4.3 STAT3基因沉默稳定表达细胞系的沉默效果34-35
• 4.4 STAT3干扰后,TLR2表达降低35
• 4.5 STAT3干扰后,TLR2的基础表达35-36
• 4.6 STAT3干扰后,IL-6和IL-1α分泌减少36-37
• 5 讨论37-39
• 6 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-55
• 参考文献49-55
• 攻读学位期间主要研究成果目录55-56
• 致谢56

【共引文献】

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本文编号：1007719