弓形虫棒状体ROP16基因转染RAW264.7的实验研究

发布时间：2017-10-11 02:03

  本文关键词：弓形虫棒状体ROP16基因转染RAW264.7的实验研究

  更多相关文章： ROP基因 RAW. 慢病毒感染

【摘要】：目的比较目前常用的5种基因导入技术将弓形虫棒状体ROP16基因导入RAW264.7,选择合适的方法提高转染效率。方法以绿色荧光蛋白p EGFP-ROP16融合表达构建质粒,采用Lipofectamine汶3000、Attractene、Fugene汶HD转染试剂以及电穿孔转染和慢病毒载体感染RAW264.7,利用荧光显微镜和流式细胞仪观察目的基因的表达、细胞生长状态并分析转染效率,从而确定最佳的基因导入途径。结果上述质粒载体对RAW264.7的转染效率依次为电转法Fugene汶HDLipofectamine汶3000Attractene。但是电转法转染后细胞死亡率较高,细胞贴壁不牢或死亡;而慢病毒感染效率可达61.2%,细胞生长状态佳,显著优于质粒载体(P0.05)。慢病毒组显著优于4个质粒组(P0.05)。结论慢病毒感染可将弓形虫棒状体ROP16成功转入RAW264.7,具有较高的转染效率,效果显著优于质粒载体,目的基因在细胞内获得高效表达。为弓形虫ROP16的功能研究提供了重要基础。
【作者单位】： 安徽医科大学病原生物学教研室;安徽医科大学第一附属医院检验科;安徽医科大学第一附属医院输血科;
【关键词】： ROP基因 RAW. 慢病毒感染
【基金】：国家自然科学基金(编号:81471983,81171606) 安徽省高校省级自然科学研究项目(编号:KJ2014A106)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 2015-05-26接收弓形虫广泛寄生于温血动物的有核细胞内,能够侵入单核巨噬细胞并在细胞内增殖。棒状体蛋白16(rhoptry protein 16,ROP16)是由虫体棒状体分泌的重要毒力相关因子,具有激酶样活性,可以直接磷酸化Stat3和Stat6[1-2],上调白介素(interleukin,IL)-4和下调IL-12的表达

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王冰;张树彪;周集体;赵不凋;杨宝灵;崔绍辉;赵轶男;;阳离子脂质体介导的基因转移机制[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年08期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张卿;李俊刚;刘玉元;赵博;张绪清;;HBV X基因转染L02细胞及其蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响[J];第三军医大学学报;2012年10期

2 童海骏;张晓玲;;壳聚糖及其衍生物分子治疗研究进展[J];国际骨科学杂志;2011年01期

3 张秋瑾;袁桂峰;;艾滋病疫苗与免疫[J];华夏医学;2014年02期

4 唐媛媛;莫绪维;陈鹤;李群;蔡亦红;沈继龙;;Chinese1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析[J];安徽医药;2015年04期

5 ;Design,synthesis and evaluation of spermine-based pH-sensitive amphiphilic gene delivery systems: Multifunctional non-viral gene carriers[J];Science China(Chemistry);2011年02期

6 陶志云;施祖灏;朱春红;宋迟;徐文娟;宋卫涛;李慧芳;;清远麻鸡NALP3基因部分cDNA序列克隆及组织表达差异分析[J];江苏农业学报;2014年01期

7 丁会芹;崔韶辉;王冰;洪洋;张树彪;;阳离子脂质体运载基因的跨膜机制[J];生命科学;2011年05期

8 张忠胜;梅元武;苏庆杰;容琼文;;Bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用[J];华中科技大学学报(医学版);2012年04期

9 周毅;陈默颖;吴飞;谢舫;熊文君;袁纪军;杜子秀;;PEG修饰的聚阳离子基因载体PEG-Polycarbam-SP在COS-7细胞中转染和毒性的研究[J];现代生物医学进展;2013年30期

10 朱林波;傅庆国;刘卫怀;孙明非;李鹏飞;张建辉;张远炎;李吉;李晔;;灵芝提取物在肿瘤免疫治疗中的调节作用[J];中华全科医学;2014年03期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 张卿;李俊刚;刘玉元;赵博;张绪清;;9HBV X基因转染L02细胞及其蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响[A];第二届全国病毒性肝炎慢性化重症化基础与临床研究进展学术会议论文汇编[C];2012年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘杰;生物降解聚酯作为抗癌药物和基因载体的研究[D];华中科技大学;2010年

2 肖波;壳聚糖及其衍生物在抗菌与转基因领域的研究[D];华中科技大学;2011年

3 张庆华;Notch信号对天然免疫的调控作用及其机制研究[D];第二军医大学;2011年

4 郑t山;功能获得性筛选的miR-137抑制胃癌增殖的机制研究[D];第四军医大学;2011年

5 刘中华;不同茎部长度shRNA对模型小鼠EGFP基因表达干扰的研究[D];西北农林科技大学;2011年

6 李国萍;不同侵袭迁移能力鼻咽癌细胞蛋白组学及转移相关基因功能研究[D];昆明医科大学;2012年

7 钱冠华;NIRF蛋白对HBV核心蛋白的作用及其机制的初步研究[D];重庆医科大学;2012年

8 高妍;新型高分子脂质体优化转染VEGF siRNA对视网膜新生血管抑制的实验研究[D];天津医科大学;2012年

9 高柳村;肝癌差异miRNA分子的鉴定及其功能机制研究[D];第四军医大学;2012年

10 朱志峰;HIF1α介导缺氧对CD4~+T细胞Foxp3表达的调控及其分子机制的研究[D];天津医科大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 单岳滨;树状大分子包裹的纳米金颗粒作为非病毒载体用于基因传递的研究[D];东华大学;2012年

2 蒋金凤;鸭肠炎病毒gC基因疫苗诱导BALB/c小鼠免疫发生的研究[D];四川农业大学;2010年

3 黎巧连;原发性肝癌组织相关趋化因子和受体的表达及其临床意义[D];福建医科大学;2012年

4 赵春艳;氨基酸类和丙二醇胺类阳离子脂质体的合成及其基因转染效率评价[D];湖南师范大学;2013年

5 黄晓仪;淀粉基载体材料与基因复合体结构对基因细胞转染特性的影响[D];华南理工大学;2013年

6 王为为;匹多莫德抑制小鼠弓形虫隐性感染活化的机制[D];安徽医科大学;2013年

7 张义华;小胶质细胞活化介导神经元损伤在弓形虫脑炎中的研究[D];安徽医科大学;2013年

8 陈少梅;广西巴马小型猪Tau基因真核表达载体的构建及功能验证[D];广西大学;2013年

9 于菲菲;还原响应型逐层组装纳米金非病毒给药载体的研究[D];第二军医大学;2013年

10 杨淼;过表达E-钙粘蛋白对TGF-β诱导的腹膜间皮细胞转分化的影响[D];中南大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 蒋一帆;力弘;陈道峰;章蕴毅;;多黏菌素B对内毒素诱导的RAW264.7细胞分泌一氧化氮的影响[J];中国临床药学杂志;2013年05期

2 Rajendra Karki;Cheol-Ho Park;Dong-Wook Kim;;Extract of buckwheat sprouts scavenges oxidation and inhibits pro-inflammatory mediators in lipopolysaccharide-stimulated macrophages (RAW264.7)[J];Journal of Integrative Medicine;2013年04期

3 庞战军,周玫,陈瑗;氧化剂对RAW264.7细胞M-CSF基因表达的调控[J];中国病理生理杂志;2001年01期

4 汪娟;蒋维;王毅;;降香中黄酮类化合物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞抗炎作用研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2013年07期

5 王旭亮;王德兴;倪杰;桑慧;司艳红;商战平;;洛伐他汀对RAW264.7体外生长抑制作用的研究[J];泰山医学院学报;2010年08期

6 陈涛;梁潇;贺明;乌宇亮;袁祖贻;;RAW264.7细胞M1/M2亚型的诱导和鉴定[J];中国分子心脏病学杂志;2011年02期

7 卞梦瑶;方勇;裴斐;赵立艳;辛志宏;安辛欣;杨方美;胡秋辉;;生姜油树脂对过氧化氢引起RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用[J];食品科学;2014年01期

8 张同欣;胡厚源;永福;;肝X受体激动剂对RAW264．7细胞摄取Ac-LDL能力的影响[J];中国药师;2007年02期

9 刘超;袁红艳;焦淑凡;余磊;常雅萍;;hCAP-18/LL-37基因转染对RAW264.7细胞活化功能的影响[J];中国生物制品学杂志;2011年02期

10 白生宾;陈红香;钟近洁;冯树梅;李甜;罗学港;;MTT法检测RAW264.7细胞活力及可能因素分析[J];中国现代医学杂志;2011年23期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 Shuhua Cui;Qinhui Tuo;DuanFang Liao;;Effect of Daxx on apoptosis of RAW264.7 cells induced by cholesterol:model of β-cyclodextrin[A];第11届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2012年

2 柳忠辉;李楠;葛敬岩;崔雪玲;;单核巨噬细胞系RAW264,7细胞肿瘤模型鼠的建立[A];2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会论文集[C];2012年

3 聂建巍;杨蓉娅;丛林;王文岭;夏志宽;李海涛;;IFN-γ对小鼠RAW264.7巨噬细胞吞噬、杀伤T.asahii的增强作用[A];2012全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2012年

4 高爱超;王习超;于海燕;李娜;于小琳;于维先;;牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)调控RAW264.7表达EphA2的研究[A];第十次全国牙周病学学术会议论文摘要汇编[C];2014年

5 程秀丽;丁帆;闫莉;谷婧丽;郝维;高雪;曹济民;;促离子型谷氨酸受体介导RAW264.7巨噬细胞释放TNF-α[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年

6 聂建巍;杨蓉娅;丛林;王文岭;夏志宽;李海涛;;IFN-γ对小鼠RAW264.7巨噬细胞吞噬、杀伤T.asahii的增强作用[A];中华医学会第十八次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2012年

7 Qinhui Tuo;Shuhua Cui;Guozuo Xiong;Tianping Li;Juan Wen;duanfang Liao;;Effect of overexpressed Daxx on apoptosis of RAW264.7 cells induced by Chol:MβCD[A];第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2014年

8 陆红玲;赵凯;卫涛涛;;Expression of inducible nitric oxide synthase potentiates the respiratory burst in RAW264.7 macrophages[A];全国自由基医学与毒理学学术交流大会论文（摘要）集[C];2011年

9 辛文妤;张天泰;杜冠华;;DL0309对LPS诱导小鼠RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响[A];第十三届中国科协年会生物医药博士论坛论文集[C];2011年

10 陈旭林;郭峰;王飞;王永杰;;不同浓度的AngⅡ对RAW264.7巨噬细胞AT1受体表达的影响[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 刘泽申;RAW给你的照片点颜色看！[N];中国计算机报;2005年

2 南城;RAW格式在后期调整上的YES或NO[N];中国摄影报;2013年

3 张善夫;专业摄影师为何厚爱RAW[N];中国摄影报;2006年

4 黄琮;RAW 让BI更智能[N];通信产业报;2004年

5 曹巍嵩;走出图像与信息的误区:RAW原始数据文件初识[N];中国摄影报;2010年

6 长人;用Camera RAW找回丢失的细节[N];中国摄影报;2010年

7 付鸿波;深度理解RAW文件格式的强大优势[N];中国摄影报;2009年

8 ;DC拍照，，请忘掉JPG[N];中国计算机报;2005年

9 王晓晨;用RAW“色彩通道法”转高质量黑白照[N];中国摄影报;2009年

10 i周刊记者 赵欣;保存50年没问题！[N];中国计算机报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 王晓慧;1.抑制糖皮质激素受体表达导致小鼠巨噬细胞系RAW264.7增殖加快的分子机制　2.非基因毒应激对RhoB的诱导作用及其生物学意义[D];第二军医大学;2005年

2 颜冬菁;Daintain在巨噬细胞RAW264.7中的功能研究[D];华中科技大学;2011年

3 刘淑清;TLR2介导TB10.4激活RAW264.7通路及细胞因子表达的研究[D];中国农业科学院;2014年

4 李

本文编号：1009843