H7N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

发布时间：2017-10-12 14:51

  本文关键词：H7N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

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【摘要】：目的利用毕赤酵母表达制备H7N9流感病毒血凝素[HA 1~525个氨基酸(aa)],并对其免疫原性进行研究。方法经全基因合成获得H7N9流感病毒[A/Hangzhou/1/2013(H7N9)]全长HA,以其为模板,PCR得到片段HA1-525,通过NspⅤ和NotⅠ双酶切连入p PICZαA载体,转入毕赤酵母X33,ELISA筛选阳性克隆。发酵培养后,表达上清经PEG20000沉淀获取HA1-525,并用糖苷内切酶H(endo H)酶切分析其N-糖链。将制备的HA1-525免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测特异性HA7抗体滴度,红细胞凝集抑制实验分析血抑活性。结果培养上清用抗HA7抗体经ELISA检测,重组菌成功表达HA7,且Western印迹检测发现有特异性弥散条带,经endo H酶切后,HA1-525为均一条带,相对分子质量约58×103,与理论大小相当,表明HA1-525存在甘露糖基化结构。HA1-525两次免疫小鼠后可产生1∶36 000的抗体滴度。以H7N9裂解苗为抗原,检测其血抑活性为1∶700。结论利用毕赤酵母表达的H7N9流感病毒HA1-525可以诱导小鼠产生针对HA7的中和抗体。
【作者单位】： 军事医学科学院生物工程研究所;沈阳药科大学生命科学与生物制药学院;
【关键词】： HN流感病毒 血凝素类 毕赤酵母 红细胞凝集抑制
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31200082) 北京市自然科学基金资助项目(7152112)
【分类号】：R373
【正文快照】： 近年来,流感病毒引起的疫情暴发越来越频繁,如2003年的H5N1、2009年的H1N1,以及2013年的H7N9等均造成一定数量的死亡案例。而预防接种是预防流感暴发的主要有效手段。传统的流感疫苗是在鸡胚中扩增流感病毒,再经过灭活或裂解等方法生产,其主要抗原为流感病毒的血凝素(hemag-gl

【共引文献】

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本文编号：1019309