小干扰RNA沉默脂肪酸合酶基因对人肝细胞株HepG2脂代谢的影响

发布时间：2017-10-12 16:23

  本文关键词：小干扰RNA沉默脂肪酸合酶基因对人肝细胞株HepG2脂代谢的影响

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【摘要】：目的:研究基因干扰技术沉默脂肪酸合酶(FAS)基因后对人肝细胞株HepG2细胞内外脂质含量及脂代谢相关基因表达的影响。方法:合成3对针对FAS mRNA不同位点序列的小干扰RNA(siRNA),分别转染至人肝细胞株HepG 2,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测空白对照组(HepG2细胞不经过任何处理)、阴性对照组(转染没有任何基因干扰作用的阴性siRNA)、FAS-siR NA-1转染组、FAS-siRNA-2转染组和FAS-siRNA-3转染组的FAS mRNA的表达。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测蛋白质的表达水平,筛选出沉默效果最佳的一对siR NA。将最有效siRNA转染至HepG2细胞,48 h后测定细胞内外甘油三酯及总胆固醇含量以及脂代谢相关基因的mRNA表达水平。结果:25 nmol/L si RNA和3μl/孔(24孔板)转染试剂的转染效率最高。FAS-siRNA-3对HepG2的FAS基因的沉默效果最好,FAS-si RNA-3转染组的FAS在mRNA水平和蛋白水平分别降低为空白对照组的(52.33±3.07)%和(51.57±3.14)%。FAS-siRNA-3沉默FAS基因后HepG2的细胞内和细胞外培养液中甘油三酯含量显著低于空白对照组,细胞外总胆固醇含量显著低于空白对照组。与空白对照组比较,FAS-siRNA-3转染组HepG2的肝脂酶基因mRNA表达水平显著升高(P0.0001),微粒体甘油三酯转运蛋白基因mRNA表达水平显著降低(P0.05),差异均有统计学意义。结论:FAS基因沉默可显著降低HepG2细胞内甘油三酯、细胞外培养液甘油三酯和总胆固醇的含量,需进一步的体内外实验加以验证。
【作者单位】： 川北医学院基础医学院生物化学教研室;川北医学院临床医学系;
【关键词】： 小干扰RNA 脂肪酸合酶 人肝细胞株HepG
【基金】：四川省应用基础研究计划(2013JY0072) 四川省教育厅重点项目(12ZA232)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 高甘油三酯血症(HTG)是动脉粥样硬化的独立危险因子,与心血管病(CVD)直接相关[1-6]。血浆甘油三酯主要来源于肝脏的从头合成(de novosynthesis)。在肝甘油三酯从头合成过程中,脂肪酸合酶(FAS)是起关键作用的多功能酶,其表达水平及活性决定了甘油三酯的合成速率以及血浆甘油三

【共引文献】

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1 李俊,李小敏,杨俊,刘映峰,孔炳耀;老年冠心病冠状动脉造影结果与中医证型、血脂及脂蛋白亚组分胆固醇含量关系的研究[J];第一军医大学学报;1999年S1期

2 王英杰;沈智杰;王肖龙;毛玉昌;郭蔚;胡卓汉;;健脾化浊方对阿托伐他汀体外代谢的影响[J];国际心血管病杂志;2013年06期

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4 韩瑛;陈志军;卢新华;邓华菲;王岐本;孙陶利;龙石银;田英;;缺血性脑卒中患者TC/HDL-C、TG/HDL-C比值与HDL亚类分布的关系[J];湘南学院学报(医学版);2014年02期

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6 李俊,李小敏,刘映峰,杨俊,张f，

本文编号：1019746