建立基于超薄切片的三维重构技术解析组织精细空间结构

发布时间：2017-10-13 08:31

  本文关键词：建立基于超薄切片的三维重构技术解析组织精细空间结构

  更多相关文章： 超薄切片 组织 高分辨 显微镜 抗体标记 三维重构

【摘要】：对生物组织内部精细结构的分析是了解生物体生理功能的基础，主要方法是对组织样品进行三维重构。重构技术涉及的主要步骤有对组织样品的处理，切片，染色、成像、二维拼接和三维重构。目前使用的组织切片主要有石蜡切片，冰冻切片，半薄及超薄切片，临床上病理分析主要采用石蜡和冰冻切片，切片较厚，分辨率较低；半薄超薄切片主要用于电镜下组织细胞亚显微结构的观察，切片较薄，分辨率远高于石蜡和冰冻切片。对获得的图片进行二维拼接和三维重构可以获得组织内部精细空间结构，但是目前的方法均存在Z轴分辨率较低的缺陷。 传统显微镜在X、Y轴上的分辨率为250nm，Z轴的分辨率是700nm，实际成像分辨率超过1μm。本文建立基于超薄切片方法的高分辨三维成像技术，可显著提高Z轴分辨率，用于组织精细结构的研究。对组织样品处理后，可将组织切成50nm-1000nm的连续半薄或超薄切片，具体切片的厚度即Z轴的分辨率。另外对切片进行染色，或者多重抗体标记，利用全自动显微镜对连续切片进行成像，对获得的图像进行二维拼接和三维重构，可以获得组织高分辨的三维空间信息。本文所建立的高分辨三维成像技术适用于各种组织内部精细结构研究，，同时超薄切片方法为超高分辨显微成像技术提供Z轴的解决方案。
【关键词】：超薄切片 组织 高分辨 显微镜 抗体标记 三维重构
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R361.2;TP391.41
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 绪论10-15
• 1.1 切片技术的发展与应用10-13
• 1.1.1 石蜡切片10-11
• 1.1.2 冰冻切片11-12
• 1.1.3 半薄/超薄切片12-13
• 1.2 三维重构技术的发展与应用13-14
• 1.3 本文的研究和意义14-15
• 第二章 材料与方法15-24
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 主要仪器15
• 2.1.2 主要试剂及配制方法15-16
• 2.2 主要实验方法16-23
• 2.2.1 样品采集16
• 2.2.2 组织固定、脱水和包埋16-19
• 2.2.3 组织超薄/半薄连续切片19-22
• 2.2.4 超薄切片染色22
• 2.2.5 多重抗体标记22
• 2.2.6 自动化成像、图像处理、二维拼接和三维重构22-23
• 2.3 本章小结23-24
• 第三章 实验结果24-42
• 3.1 人正常结肠半薄切片高分辨图像分析24-26
• 3.2 人舌鳞癌半薄切片高分辨图像分析26-35
• 3.2.1 人舌鳞癌半薄切片与石蜡切片对比28-29
• 3.2.2 人舌鳞癌半薄切片异常增生细胞、癌细胞清晰可见29-33
• 3.2.3 人舌鳞癌半薄切片基底膜的变化33-34
• 3.2.4 人舌鳞癌半薄切片中神经的定位34-35
• 3.3 小鼠肝脏组织的半薄切片染色和三维重构35-40
• 3.3.1 小鼠肝脏组织的半薄切片染色35-37
• 3.3.2 小鼠肝脏组织的二维拼接和三维重构37-39
• 3.3.3 小鼠脑组织超薄切片的多重荧光标记和三维空间重构39-40
• 3.4 本章小结40-42
• 第四章 总结与展望42-44
• 参考文献44-47
• 致谢47-49
• 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文49

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