构建牛角膜基质细胞pellet体外三维培养模型的实验研究

发布时间：2017-10-13 08:47

  本文关键词：构建牛角膜基质细胞pellet体外三维培养模型的实验研究

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【摘要】：目的：研究构建牛角膜基质细胞体外三维培养模型Pellet中种子细胞的选择。 方法：分离原代牛角膜基质细胞,分别选取P0、P1牛角膜基质细胞作为种子细胞,分为两组(PO组、P1组)进行Pellet模型的构建,以含10%FBS (fatal bovine serum)的DMEM培养基进行培养。对培养了48h的牛角膜基质细胞进行Calcein AM/PI染色；培养2w大体观观察培养模型生长趋势；培养3w进行HE及MASSON染色,观察细胞活性及细胞外基质的形成情况。 结果：PO组Pellet模型构建不成功,48h后Calcein AM/PI染色显示,细胞活性差,2w后观察细胞未见明显抱团生长,震荡易松散,无法进行HE及MASSON染色。P1组Pellet模型构建成功,培养2w后大体观显示,细胞明显抱团生长,呈粒状,震荡不散开。培养3w后HE染色显示,细胞密集生长,细胞团中坏死细胞极少；MASSON染色显示可以形成细胞外基质。 结论：第一代牛角膜基质细胞可以作为种子细胞成功构建Pellet体外三维培养模型。 目的：研究血清在构建角膜基质细胞Pellet体外三维培养模型中的影响。 方法：分离原代牛角膜基质细胞,取P1牛角膜基质细胞作为种子细胞,分为两组(有血清组、无血清组)进行Pellet模型的构建,分别以基础培养液及10%FBS (fatal bovine serum)的培养液进行培养,大体观观察培养模型生长趋势；培养3w进行HE、MASSON染色及Calcein AM/PI染色,并进行透射电子显微镜观察,观察细胞活性及细胞外基质的形成排列情况。 结果：无血清组Pellet模型,3w后观察细胞未见明显抱团生长,震荡易松散,无法进行HE及MASSON染色及电镜观察。进行Calcein AM/PI染色显示,死细胞较多。有血清组Pellet模型构建成功,培养3w后大体观显示,细胞明显抱团生长,呈粒状,震荡不散开。培养3w后HE染色显示,细胞密集生长,细胞团中坏死细胞极少；进行Calcein AM/PI染色显示,活细胞占极大多数,极少部分死细胞散在存在,MASSON染色显示可以形成细胞外基质,电镜观察发现细胞外胶原形成并排列紧密。 结论：含血清的培养环境能成功构建牛角膜基质细胞体外Pellet三维培养模型,且能生成含有胶原纤维的细胞外基质。
【关键词】：三维培养 角膜基质细胞 种子细胞 三维培养 角膜基质细胞 胎牛血清
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329
【目录】：

• 中英文缩略词表5-6
• 第一部分 体外三维培养牛角膜基质细胞Pellet模型种子细胞优化的实验研究6-24
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-10
• 材料10-11
• 方法11-15
• 结果15-19
• 讨论19-22
• 结论22-23
• 参考文献23-24
• 第二部分 血清在构建牛角膜基质细胞Pellet体外三维培养模型中的作用观察24-48
• 摘要24-25
• ABSTRACT25-27
• 前言27-28
• 材料28-29
• 方法29-33
• 结果33-41
• 讨论41-45
• 结论45-46
• 参考文献46-48
• 综述48-58
• 参考文献55-58
• 致谢58-59
• 攻读学位期间发表的学术论文59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1023920