胞磷胆碱对偏头痛模型大鼠三叉神经节中TRPM8表达影响的研究

发布时间：2017-10-13 21:23

  本文关键词：胞磷胆碱对偏头痛模型大鼠三叉神经节中TRPM8表达影响的研究

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【摘要】：目的:通过建立硝酸甘油偏头痛大鼠模型，并对其进行预防性的药物(氟桂利嗪、胞磷胆碱、联合用药)干预，留取颅底三叉神经组织，观察各组大鼠三叉神经节中TRPM8及谷氨酸受体的表达变化。证实TRPM8通过谷氨酸受体的激活参与偏头痛发作机制,也为临床使用胞磷胆碱预防性治疗偏头痛提供理论和实验依据。 方法:月龄为2-3个月的清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠（体重180-200g），共50只，按随机数字表法，将大鼠随机分为空白对照组（n=10）和硝酸甘油模型组（n=40），其比例为1:4。空白对照组将生理盐水(NS,10ml／kg)注入大鼠颈背部皮下，模型组依从Tassorelli法：在大鼠颈背部皮下注射硝酸甘油(NTG,10mg／kg)，每周注射一次，并进行行为学评分；随后，再将模型组大鼠按之前分组方法随机分为4组，分别为模型对照组（n=10，灌胃注射NS10ml／kg），氟桂利嗪组（n=10，1.25mg/Kg灌胃），胞磷胆碱组（n=10，0.1g/Kg）,联合组（n=10，即，氟桂利嗪胶囊1.25mg/Kg，胞磷胆碱钠0.1g/Kg），从第二周第一天开始，每只大鼠每周仍一次颈部皮下注射硝酸甘油，并同时每天给予不同药物灌胃,第5周颈部皮下注射硝酸甘油，分别灌药，4小时后，用10%水合氯醛麻醉，心脏灌注，开颅取颅底三叉神经节，一部分用4%多聚甲醛固定并处于4℃保存：（1）采用HE染色法对三叉神经组织进行染色，观察三叉神经组织结构变化情况；（2）采用免疫组织化学方法（SP法）检测谷氨酸受体在各组偏头痛大鼠三叉神经节中的表达变化；（3）另外一部分三叉神经节在液氮中保存：采用Western blot检测TRPM8受体蛋白的表达变化。 结果：每周每只大鼠行为学评分结果提示：模型对照组与空白对照组比较，大鼠行为学评分差异有统计学意义（P0.01）,故成功建立了硝酸甘油偏头痛大鼠模型；通过预防性药物治疗后，氟桂利嗪组,胞磷胆碱组，联合组与模型对照组比较，差异有统计学意义（P0.01），提示各药物对大鼠行为均存在影响。胞磷胆碱组与氟桂利嗪组,差异有统计学意义（P0.01），提示胞磷胆碱减轻大鼠行为学表现效果优于氟桂利嗪；联合组与氟桂利嗪组、胞磷胆碱组比较，差异有统计学意义（P0.01），联合用药预防控制偏头痛大鼠的行为表现优于单独药物干预。三叉神经节HE染色提示：模型组与空白对照组三叉神经节结构一致，进而说明偏头痛的发生可能不影响三叉神经节的结构变化，只发生了功能性紊乱；谷氨酸受体免疫组织化学（SP法）显示：模型对照组中的谷氨酸受体呈强阳性表达，明显高于空白对照组，氟桂利嗪组呈阳性，胞磷胆碱组呈弱阳性，联合组几乎是阴性表达，其OD值的单因素方差分析结果显示：谷氨酸受体在每一个组中的表达差异有统计学意义（P＜0.01）；TRPM8的Westernblot结果显示：模型对照组中TRPM8蛋白水平上调比空白对照组显著，氟桂利嗪组稍下降，胞磷胆碱组比氟桂利嗪组下调幅度大，以联合组下调幅度最为显著，其灰度值经单因素的方差分析提示TRPM8在每个组别中的表达差异有统计学意义（P＜0.01）。模型对照组第五周评分与TRPM8灰度值相关分析显示：r=0.822,P0.01,差异有统计学意义，提示TRPM8的上调与评分呈正相关，TRPM8表达增加，评分升高，临床症状越严重，应用胞磷胆碱预防干预后，TRPM8表达下调，提示胞磷胆碱通过降低TRPM8表达，，从而使行为学评分减低，症状减轻，提示胞磷胆碱有预防治疗偏头痛的作用。从模型对照组中谷氨酸受体OD值与TRPM8灰度值相关分析结果显示：r=0.794,P0.01，差异有统计学意义，提示谷氨酸受体与TRPM8表达呈正相关，谷氨酸受体表达升高可能对TRPM8蛋白表达有促进协同作用。 结论：（1）偏头痛发作时，三叉神经组织在解剖结构上无明显改变，提示只是功能性异常。（2）TRPM8蛋白上调和谷氨酸受体的激活可能参与了偏头痛发生机制，并具有协同作用；（3）胞磷胆碱作为一种神经保护药，可预防神经功能紊乱，保护神经元，在预防偏头痛发作这类神经性疼痛疾病中起到了可观的效果，若联合经典预防性药物效果更明显。
【关键词】：TRPM8 胞磷胆碱 谷氨酸 硝酸甘油 偏头痛 大鼠
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R747.2;R-332
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-16
• 材料与方法16-25
• 结果25-33
• 讨论33-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 英汉缩略词对照表43-44
• 致谢44-45
• 综述45-54
• 参考文献51-54

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本文编号：1027145