CecropinA-thanatin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响
本文关键词：CecropinA-thanatin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响
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【摘要】：目的 本研究测定了课题组前期合成、表达的CecropinA-thanatin杂合肽对临床分离的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌的体外抑菌活性，并通过动物实验，对该杂合肽不同剂量、不同给药途径对小鼠生长性能及免疫功能的影响进行研究和探讨，为该基因工程抗菌肽的临床应用奠定了基础。 方法 1以课题组人工设计合成的CecropinA-thanatin杂合肽为研究对象，进行大规模的蛋白表达，对不同批次的表达产物进行混合后测定混合液的MIC，，并对临床分离的革兰氏阳性菌（金葡菌）和革兰氏阳性菌阴性菌（大肠杆菌）进行体外抑菌活性的测定； 2选择3－4周龄、近交系BALB/c小鼠，进行分组、称重；处理因素分别为高、中、低剂量灌胃抗菌肽，中剂量腹腔注射抗菌肽，中剂量灌胃庆大霉素，空白对照组灌胃pPICZαA空载体转化酵母的上清，各处理方法连续处理4周；4周后脱臼处死小鼠，称量体重、脾脏、胸腺； 3腹腔注射2%SRBC免疫小鼠，脱臼处死小鼠后取脾进行脾淋巴增值试验、抗体细胞生成试验； 4提前一小时注射5%鸡红细胞，脱臼处死小鼠后吸取腹腔渗出液涂片镜检，油镜下计算巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数； 5摘眼球取血后收集血清，ELISA试验检测血清中的TNF-α含量；收集小鼠的肠组织标本，进行荧光定量PCR试验检测空肠组织中的TNF-α含量。 结果 1大规模表达了CecropinA-thanatin杂合肽，经测定杂合肽混合液的MIC为0.45×10-3mol/L，经体外抑菌活性测定，CecropinA-thanatin杂合肽对革兰阳性菌(金葡菌)和革兰氏阴性菌(大肠杆菌)均具有明显的抑菌活性； 2在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的体重增长率有差别，高剂量CecropinA-thanatin杂合肽灌胃组小鼠的生长性能明显优于其他组小鼠的生长性能； 3检测各组小鼠的免疫器官指数，在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的脾脏指数、胸腺指数有差别，灌胃高剂量CecropinA-thanatin杂合肽可以显著提高小鼠的脾脏指数、胸腺指数； 4检测各组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力，在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的脾淋巴细胞刺激指数有差别，灌胃、腹腔注射中剂量CecropinA-thanatin杂合肽均可以提高小鼠的脾淋巴细胞刺激指数； 5检测各组小鼠的抗体生成细胞数，在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的抗体生成细胞数有差别，灌胃中剂量CecropinA-thanatin杂合肽可以提高小鼠的抗体生成细胞数； 6检测各组小鼠的巨噬细胞吞噬功能，在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数有差别，灌胃中剂量CecropinA-thanatin杂合肽可以显著提高小鼠的巨噬细胞吞噬功能； 7检测各组小鼠血清、空肠组织中的TNF-α蛋白水平及mRNA表达水平，在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的TNF-α的浓度及mRNA表达水平有差别，灌胃低剂量CecropinA-thanatin杂合肽、庆大霉素可以显著提高小鼠的TNF-α的浓度及mRNA表达水平。 结论 大批量的表达了人工合成的CecropinA-thanatin杂合肽，混合液经MIC试验测定其MIC值为0.45×10~(-3)mol/L，体外抑菌实验证实其对临床分离的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有抑菌活性；本研究在此研究基础上对该杂合肽进行动物实验，验证其在体内的生物功能以及该CecropinA-thanatin杂合肽对小鼠的生长性状及免疫功能的影响，得出结论为CecropinA-thanatin杂合肽对小鼠的生长性能有作用，可以提高小鼠的体重增长率；合适的CecropinA-thanatin杂合肽给药剂量和给药途径可以显著提高小鼠的免疫器官指数，细胞、体液免疫能力，巨噬细胞吞噬能力，以上实验结果说明课题组前期设计、合成、表达的CecropinA-thanatin杂合肽可以提高小鼠的生长性能及免疫功能。为该基因工程抗菌肽的临床应用奠定了基础。
【关键词】：CecropinA-thanatin杂合肽 小鼠 免疫功能
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：
- 摘要4-7
- ABSTRACT7-11
- 中英文缩略词表11-14
- 前言14-17
- 材料与方法17-36
- 实验结果36-48
- 讨论48-53
- 结论53-54
- 参考文献54-56
- 综述56-64
- 综述参考文献62-64
- 致谢64-65
- 攻读学位期间发表的学术论文目录65-66
- 个人简历66
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本文编号：1032308
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