分子伴侣Trigger Factor新功能位点的鉴定

发布时间：2017-10-16 07:14

  本文关键词：分子伴侣Trigger Factor新功能位点的鉴定

  更多相关文章： Trigger Factor 分子伴侣 蛋白折叠 蛋白聚集

【摘要】：分子伴侣广泛存在于细菌、酵母、哺乳动物中，在细胞中组成了庞大健全的网络，能够参与到多种细胞生理过程中，，例如帮助蛋白质进行折叠；参与蛋白复合体的组装；参与蛋白质转运、分泌等过程。此外，分子伴侣网络在蛋白质质量控制方面也发挥着重要的作用，通过对错误折叠或者变性蛋白进行去折叠和解聚作用，能够促使其降解。不同分子伴侣之间的相互协调共同作用，可以保证细胞内的蛋白质处于稳定平衡的状态。 Trigger Factor (TF)是原核分子伴侣网络中的重要成员。TF包含两部分结构：肽脯氨酰顺反异构酶（PPIase）结构域和一个由N-末端和C-末端共同构成的裂缝（Crevice）结构。这个裂缝区域为刚刚离开核糖体出口位点的多肽提供了保护空间使其可以正确折叠。TF具有分子伴侣活性的同时又有折叠酶活性，还能够调节蛋白折叠速度，协助蛋白质翻译之后的组装。在TF的作用下，绝大部分蛋白质能够快速高效地完成折叠，这使得TF在协助新生肽链折叠方面具有举足轻重的作用。 通过对TF结构和序列进行分析，我们在TF的PPIase结构域和C-末端结构域发现两个可能与TF分子伴侣功能相关的疏水区域，为了确定这两个区域在TF分子伴侣功能中的作用，我们构建了两个缺失突变体以及四个位点突变体，即：缺失PPIase结构域的NC、TF389(1-389aa)、I195G、F233G、F322S、L336S/L337G。在利用亲合层析及凝胶层系等方法制备得到目的蛋白后，我们使用圆二色谱仪和荧光光谱仪对TF野生型和突变体蛋白的二级和三级结构进行了表征。然后我们选择了三种不同分子伴侣活性测定底物即Lysozyme、BCAII和GAPDH，研究了TF野生型和突变体分子伴侣活性，分析了所选疏水区域在TF分子伴侣功能中的作用。实验结果表明，所选疏水区域是TF重要的分子伴侣功能位点，其改变能够引起TF分子伴侣活性发生显著性变化。本研究将有助于加深人们对分子伴侣TF结构与功能的认识。
【关键词】：Trigger Factor 分子伴侣 蛋白折叠 蛋白聚集
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 绪论9-18
• 1.1 蛋白质折叠和聚集9-10
• 1.2 分子伴侣简介10-11
• 1.3 TF 结构和功能11-13
• 1.4 TF 与核糖体及其他分子伴侣相互作用13-15
• 1.5 本文主要研究内容及意义15-17
• 1.6 技术路线图17-18
• 第2章 实验材料和方法18-26
• 2.1 实验材料18-20
• 2.1.1 菌株和质粒18
• 2.1.2 主要试剂及试剂盒18-19
• 2.1.3 主要仪器19-20
• 2.2 实验方法20-25
• 2.2.1 TF-pRSET 重组体的构建20-21
• 2.2.2 突变体的制备21-22
• 2.2.3 TF 表达条件优化及大量制备22
• 2.2.4 TF 突变体蛋白的纯化及浓度测定22-23
• 2.2.5 TF 突变体蛋白色氨酸（Trp）荧光光谱和圆二色谱检测23
• 2.2.6 TF 突变体蛋白分子伴侣活性检测23-25
• 2.2.7 透析袋的处理25
• 2.3 本章小结25-26
• 第3章 TF 突变体的设计制备与表征26-36
• 3.1 TF 突变体设计26
• 3.2 TF-pRSET 重组体的构建及突变体制备26-29
• 3.3 TF 突变体蛋白的纯化29-31
• 3.4 TF 突变体蛋白结构检测31-35
• 3.4.1 TF 突变体蛋白 Trp 荧光发射光谱检测32-33
• 3.4.2 TF 突变体蛋白圆二色谱检测33-35
• 3.6 本章小结35-36
• 第4章 TF 突变体蛋白分子伴侣活性研究36-47
• 4.1 TF 突变体蛋白对变性 Lysozyme 的复性作用36-39
• 4.1.1 TF 突变体蛋白协助变性 Lysozyme 重新折叠36-37
• 4.1.2 TF 突变体蛋白对变性 Lysozyme 聚集的作用37-39
• 4.2 TF 突变体蛋白对变性 BCAII 的复性作用39-42
• 4.2.1 TF 突变体蛋白协助变性 BCAII 重新折叠39-41
• 4.2.2 TF 突变体蛋白对变性 BCAII 聚集的作用41-42
• 4.3 TF 突变体蛋白对变性 GAPDH 的复性作用42-45
• 4.3.1 TF 突变体蛋白协助变性 GAPDH 重新折叠42-44
• 4.3.2 TF 突变体蛋白对变性 GAPDH 聚集的作用44-45
• 4.4 本章小结45-47
• 结论47-48
• 参考文献48-54
• 致谢54

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 刘佳佳;李文峗;张磊;梁承远;姚其正;;C3取代靛红衍生物的研究进展[J];国外医药(抗生素分册);2013年03期

2 LUO LiaoFu;;Quantum theory on protein folding[J];Science China(Physics,Mechanics & Astronomy);2014年03期

3 李密;刘连庆;席宁;王越超;;AFM单分子力谱技术测量膜蛋白力学特性的研究进展[J];科学通报;2014年13期

4 Mi Li;Lianqing Liu;Ning Xi;Yuechao Wang;;Progress in measuring biophysical properties of membrane proteins with AFM single-molecule force spectroscopy[J];Chinese Science Bulletin;2014年22期

5 梁丽娜;战丽彬;胡守玉;闫云;郑路平;孙杰;余丹;;滋补脾阴法对脾阴虚糖尿病大鼠脑组织β淀粉样蛋白及胰岛素降解酶的调节作用[J];世界科学技术-中医药现代化;2013年09期

6 焦铭;李笔;陶敏;黄俊潮;;胰岛淀粉样多肽诱导β细胞凋亡机制的研究进展[J];生命科学;2014年03期

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 李颖;微流控芯片超快混合器及生物大分子折叠动力学应用研究[D];华中科技大学;2013年

2 梁丽娜;脾阴虚糖尿病认知功能障碍的发病机制及滋补脾阴方药的调控作用研究[D];大连医科大学;2012年

3 王允;棘孢木霉和球毛壳菌免疫诱导蛋白及其功能研究[D];哈尔滨工业大学;2013年

4 吕春梅;利用单分子力谱研究凝溶胶蛋白的力学性质[D];南京大学;2013年

5 孔凡楼;晚期糖基化修饰诱导β_2微球蛋白聚集及其毒性机理研究[D];武汉大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 唐斌卿;不同长度的多肽链在疏水表面上自组装的分子动力学模拟[D];华南理工大学;2013年

2 王晓梅;双酚A对小鼠肝、肾氧化损伤的影响[D];南华大学;2013年

3 张方圆;血清白蛋白及多肽与小分子的相互作用研究及纳米材料在其中的应用[D];南昌大学;2013年

4 郭漫;静电极化效应对蛋白周围水分子的影响及三氟乙醇对蛋白的影响[D];华东师范大学;2013年

5 李雅楠;芦丁和Anti-XD5分别对IAPP和β-淀粉样蛋白影响的研究[D];宁夏大学;2013年

6 李杰;巯基试剂对淀粉样纤维化的分子机制研究[D];陕西师范大学;2013年

7 冯双;酚类化合物对蛋白质淀粉样纤维化过程作用的分子机制研究[D];陕西师范大学;2013年

8 路伟振;Trigger factor表面疏水区对其分子伴侣功能的影响[D];哈尔滨工业大学;2012年

9 胡蓉蓉;足细胞内质网应激对钙神经蛋白表达的调控研究[D];北京协和医学院;2011年

10 李晓超;淀粉样蛋白的聚集性及其抑制剂的研究[D];华中科技大学;2012年

本文编号：1041320