GⅡ-4型诺如病毒P粒子的表达及其与组织血型抗原结合的初步研究

发布时间：2017-10-17 06:08

  本文关键词：GⅡ-4型诺如病毒P粒子的表达及其与组织血型抗原结合的初步研究

  更多相关文章： GⅡ-4诺如病毒 P粒子 组织血型相关抗原

【摘要】：目的： 克隆诺如病毒（NVs）GⅡ-4型1991年至今五个不同年代变异株的P区基因，并表达、纯化其蛋白，即P粒子；通过分析不同P粒子与其受体——人组织血型相关抗原（HBGAs）之间的结合模式，以确定GⅡ-4诺如病毒感染的宿主范围，为防治GⅡ-4诺如病毒的感染提供科学数据。 方法： 选取五株不同年代GⅡ-4型诺如病毒变异株，分别克隆其ORF2区，以此为基础扩增P区并与PGEM-Teasy载体相连，得到重组质粒PGEM-Teasy-P。之后用BamH I和Not I双酶切将P区基因切下连接至PGEX-4T-1表达载体，得到PGEX-4T1-P表达质粒。利用GST原核表达系统经IPTG诱导、超声破碎细胞后表达P蛋白（此时带有GST蛋白标签）。利用琼脂糖凝胶4B对P蛋白进行纯化并用thrombin凝血酶去除GST标签以形成二十四聚体的P粒子。利用制备成功的P粒子、实验室现有的GⅡ-4型诺如病毒免疫家兔的血清，及从深圳收集的117份唾液标本，用酶免疫分析试验（EIA）测定五株变异株的P粒子与受体组织血型相关抗原（HBGAs）之间的结合模式。 结果： 1.成功构建了五株GⅡ-4型诺如病毒的PGEX-4T1-P表达质粒。 2.制备了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株的P粒子，大小为38KDa。 3.测定了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株P粒子与受体HBGAs之间的结合模式，Camberwell株、95/96US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型（O+）唾液结合，与O型非分泌型（O-）不结合，，Hunter株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾液均不结合。 结论： HBGAs与GⅡ-4型诺如病毒P粒子的结合呈现毒株特异性结合，Camberwell株、95/96US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型（O+）唾液结合，与O型非分泌型（O-）不结合，Hunter株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾液均不结合。
【关键词】：GⅡ-4诺如病毒 P粒子 组织血型相关抗原
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373
【目录】：

• 主要英文缩略语索引5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-26
• 1. 试验材料13-16
• 2. 试验方法16-26
• 结果26-31
• 1. 五株 GⅡ-4 型 NVs ORF2 区的扩增26
• 2. 五株 GⅡ-4 型 NVs P 区基因的扩增26-27
• 3. 构建 PGEM-Teasy-P 重组质粒27
• 4. 构建 PGEX-4T1-P 表达质粒27-28
• 5. P 蛋白的小量表达28
• 6. SDS-PAGE 鉴定 P 粒子28-29
• 7. SDS-PAGE 鉴定 GST 标签蛋白、融合蛋白及 P 粒子29
• 8. 五株 GⅡ-4 NVs 与深圳 117 份唾液的 EIA 结合实验结果29-31
• 讨论31-34
• 1. GST 原核表达系统与 P 粒子的制备31-32
• 2. NVs 与 HBGAs 的结合模式研究32-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述38-45
• 参考文献42-45
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文45-46
• 致谢46

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 徐锦;孙家娥;丁韵珍;苏犁云;杨毅;;2001至2005年上海部分地区腹泻住院患儿诺若病毒分子临床流行病学研究[J];中国循证儿科杂志;2008年05期

2 林健东;杨北兵;陈静浓;;诺如病毒感染国内外研究进展[J];预防医学论坛;2010年08期

3 张翠红;封少龙;;诺如病毒研究进展[J];中国保健营养;2013年08期

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 刘志华;广州地区婴幼儿病毒性腹泻感染研究[D];广州医学院;2010年

2 张晓红;北京地区成人腹泻诺如病毒的流行和分子特征的初步研究[D];中国疾病预防控制中心;2009年

3 王瑞雪;天津地区婴幼儿诺如病毒感染的分子流行病学特征[D];天津医科大学;2010年

4 李永清;我国甘肃省五岁以下腹泻住院儿童杯状病毒分子流行病学研究[D];中国疾病预防控制中心;2010年

本文编号：1047195