Integrinα9在人ADSCs向LECs分化过程中表达变化的相关研究
发布时间：2017-10-17 08:47
本文关键词：Integrinα9在人ADSCs向LECs分化过程中表达变化的相关研究
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【摘要】：目的从人体脂肪组织中分离培养出脂肪源性间充质干细胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)，诱导其向淋巴管内皮细胞(Lymphatic endothelial cells, LECs)分化，同时探讨分化过程中整合蛋白α9(integrinα9)表达的变化，旨在寻找淋巴水肿分子治疗靶点，为ADSCs应用于淋巴水肿的分子治疗奠定实验基础。 方法 ①从吸脂术后废弃的人体脂肪组织中分离培养出ADSCs，倒置相差显微镜观察原代及传代细胞的形态特征。 ②流式细胞仪（FCM）检测第三代ADSCs表面特征性抗原的表达，达到鉴定ADSCs的目的；MTT法绘制生长曲线，明确传代过程中细胞生长情况是否发生改变。 ③用人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)、人血管内皮细胞生长因子A（VEGF-A）、血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）诱导其向LECs方向分化，同时以人LECs作为阳性对照组。 ④Western Blot检测各组细胞LECs表面特征性抗原淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(LYVE-1)、血管内皮细胞特征性抗原CD34及integrinα9的表达，明确实验组向LECs的分化，同时探讨integrinα9在诱导前后表达的变化。 ⑤流式细胞仪（FCM）检测各组细胞周期，分析分化前后细胞周期的改变，使用SPSS17.0对实验数据进行统计分析。 结果 ①ADSCs贴壁生长，呈长梭形，对密度的依赖性较高，传代后细胞生长速度明显增快，第1、3、5代细胞生长曲线均为典型的“S”形。 ②FCM检测抗原结果：CD29、CD90阳性表达， CD34、CD45阴性表达，与MSCs的特性相符合。 ③Western Blot结果显示：阳性对照组中LECs表面特征性抗原LYVE-1的表达为阳性，血管内皮细胞表面特征性抗原CD34为阴性表达，而integrinα9的表达与LYVE-1的表达趋势一致，亦为阳性表达；实验组LYVE-1亦为阳性表达、且CD34为阴性表达，明确了LECs的生成，integrinα9为阳性表达，同时LYVE-1及integrinα9的表达水平低于二者在阳性对照组中的表达；阴性对照组中LYVE-1、integrinα9及CD34的表达均为阴性。 ④FCM检测各组细胞周期，分析各组细胞G0/G1期细胞比例，其中实验组（65.462.73）%、阳性对照组（62.350.50）%明显小于阴性对照组（88.791.53）%，使用方差分析比较三组细胞G0/G1期细胞比例的差异（F=186.77，P㩳0.01），差异具有统计学意义。SNK法进行两两比较，实验组G0/G1期百分比显著小于阴性对照组（q=22.06，P㩳0.05），差异具有统计学意义；阳性对照组G0/G1期百分比显著小于阴性对照组（q=25.01，，P㩳0.05），差异具有统计学意义。实验组与阳性对照组之间G0/G1期百分比无明显差异(q=2.94，P=0.083㧐0.05)结论 ①ADSCs贴壁生长、长梭形，原代培养时细胞呈现明显的集落生长趋势，且对密度的依赖性高，传代后细胞增殖速率明显增强，传代后细胞的形态及生长情况不发生明显改变，传代后细胞的纯度较高可用于ADSCs向LECs分化的研究。 ②使用VEGF-A、VEGF-C及PDGF-BB可成功将ADSCs诱导分化为LECs（LYVE-1表达阳性、CD34表达阴性，证实了LECs的 生成），ADSCs具有向LECs分化的潜能，在对各组细胞周期进行检测的时候我们发现，分化前后细胞的周期发生了改变，处于G0/G1期的细胞比例明显减少。 ③Integrinα9在LECs中的表达趋势与LYVE-1的表达相一致，作为prox1基因下游调节关键因子，其在LECs的形成过程中可能发挥着极其重要的作用，该分子有望在淋巴水肿的再生治疗中成为重要的分子靶点之一，但Prox1-integrinα9信号通路的具体调节机制目前还并不清楚，有待进一步深入研究。
【关键词】：脂肪源性间充质干细胞 淋巴管内皮细胞 血管内皮细胞生长因子C 淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1 整合蛋白α9
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照5-7
- 中文摘要7-10
- 英文摘要10-14
- 第一部分 人 ADSCs 的分离、培养及鉴定14-20
- 前言14
- 1、材料与方法14-16
- 2、实验结果16-17
- 3、讨论17-18
- 4、结论18-20
- 第二部分 ADSCs 向 LECs 分化的相关研究20-30
- 前言20-21
- 1、材料与方法21-26
- 2、实验结果26-27
- 3、讨论27-29
- 4、结论29-30
- 全文小结30-31
- 参考文献31-35
- 附图（Figures）35-38
- 文献综述38-48
- 参考文献43-48
- 致谢48-49
- 攻读硕士期间发表论文49-50
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 白英伟;田兴松;;骨髓间充质干细胞向淋巴管内皮细胞的分化潜能[J];中国现代普通外科进展;2011年05期
2 王刚;周广东;蒋朝华;曹卫刚;;脂肪间充质干细胞参与鼠尾淋巴水肿阻塞区淋巴管再生的研究[J];组织工程与重建外科杂志;2011年01期
本文编号：1047887
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