AphA蛋白对副溶血弧菌vopT的转录调控研究

发布时间：2017-10-18 05:31

  本文关键词：AphA蛋白对副溶血弧菌vopT的转录调控研究

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【摘要】：【目的】研究副溶血弧菌AphA对vop T的转录调控机制。【方法】提取野生株(WT)和aphA突变株(ΔaphA)的总RNA,采用引物延伸实验研究vop T的转录起始位点,并根据产物的丰度差异判断AphA对其调控关系。分别将WT和ΔaphA的总RNA逆转录成c DNA,利用实时定量RT-PCR进一步研究AphA对靶基因的调控关系。将vop T的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒转入WT和ΔaphA中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定AphA对vop T的调控关系。PCR扩增靶基因整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,利用凝胶阻滞实验(EMSA)验证His-AphA对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用。【结果】vop T只有一个转录起始位点A(-86),且其转录活性受AphA的间接抑制。RT-PCR和EMSA结果显示AphA对vtrA的转录也具有间接的抑制作用。【结论】AphA间接抑制vop T转录,且该间接抑制作用与VtrA无关。
【作者单位】： 河北北方学院附属第一医院微生物科;江苏大学医学院;北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室;
【关键词】： 副溶血弧菌 转录调控 AphA vopT
【基金】：江苏大学高级人才科研启动基金项目(No.14JDG166) 国家自然科学基金项目(No.31170127)
【分类号】：R378
【正文快照】： 副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一种嗜盐的革兰氏阴性弧菌,主要栖息于海水和海产品中。当人们食用生的或未被彻底煮熟的海产品时,可能会被其感染而引起以腹痛、腹泻、恶心、发热等为主要症状的急性胃肠炎[1]。流行病学调查显示副溶血弧菌已成为沿海地区引发食物中毒的

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1053210