H-2K~b限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗的构建与鉴定

发布时间：2017-10-21 09:29

  本文关键词：H-2K~b限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗的构建与鉴定

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【摘要】：目的构建H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽的真核表达载体并检测其在293T细胞中的表达,并鉴定疫苗抗肿瘤效应。方法筛选鉴定H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位9肽,设计并合成肽疫苗核酸序列,插入p UC57载体,经酶切和测序鉴定,亚克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)及p EGFP-N1载体,转染293T细胞,RT-PCR鉴定目的基因的转录,共聚焦显微镜鉴定目的基因的表达。构建pc DNA3.1(+)-WT1免疫小鼠,取小鼠脾细胞进行体外特异CTL杀伤FBL3细胞试验。结果构建的基因疫苗经测序、双酶切及PCR鉴定确认无误;其携带的目的基因可在293T细胞中表达。免疫小鼠后特异CTL对FBL3杀伤结果高于对照组(P0.05)。结论成功构建了H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗,载体疫苗能在真核细胞中成功表达,疫苗特异CTL具有体外杀伤肿瘤细胞功能,为提高WT1肽疫苗的抗肿瘤效应提供了新思路。
【作者单位】： 山西医科大学微生物免疫学教研室;
【关键词】： H-Kb限制性 WT蛋白 CTL 肽表位 基因疫苗
【基金】：山西省科技攻关项目(20140313011-18)
【分类号】：R392
【正文快照】： Wilms瘤基因1(Wilms’tumor gene 1,WT1)首先在肾母细胞瘤中作为抑癌基因被克隆鉴定[1],随后被证明在白血病和实体瘤中是癌基因。正如本课题组之前研究所述[2],WT1蛋白是广谱性免疫治疗恶性肿瘤很有前景的靶抗原。以WT1蛋白CTL表位肽为基础的小鼠体内[3],人体外[4]以及临床试

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本文编号：1072597