人脐带沃顿胶间充质干细胞体外分离条件的优化及传代效应的流式细胞学检测

发布时间：2017-10-21 12:39

  本文关键词：人脐带沃顿胶间充质干细胞体外分离条件的优化及传代效应的流式细胞学检测

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【摘要】：目的观察不同胶原酶消化方法对人脐带沃顿胶间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)分离和培养结果的影响,并鉴定其分化潜能;探讨传代效应对其免疫表型的影响。方法将制备好的脐带标本分别加入Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅳ型胶原酶,持续消化4~18 h,筛网过滤,离心收集细胞,用DMEM/F12培养基重悬细胞,调整细胞密度4.8×103~1×104/cm2,接种培养,比较不同消化法分离人脐带沃顿胶MSC的效果。Von kossa钙结节染色、四环素荧光标记鉴定人脐带沃顿胶MSC向成骨方向分化的能力,RT-PCR鉴定其向心肌细胞分化的能力。应用流式细胞仪检测连续传代后MSC的免疫表型变化。结果Ⅰ型胶原酶消化法能够从人脐带沃顿胶获取了数量较多、活力较高的MSC,而且细胞出现伸展的时间及原代培养时间均短于Ⅱ型胶原酶及Ⅳ型胶原酶消化法。表面标记分析显示:随着传代次数的增加,阳性标记CD29、CD44、CD73、CD90、CD105的表达百分率没有变化,而阴性标记CD31、CD34和HLA-DR的表达率增加明显。体外诱导实验表明:来源于人脐带沃顿胶的MSC具有体外成骨和成心肌样细胞分化的能力。结论Ⅰ型胶原酶消化法简单易行,对细胞损伤小,能稳定、高效地从人脐带沃顿胶中分离出MSC。
【作者单位】： 协和干细胞基因工程有限公司;中国医学科学院、北京协和医学院 血液学研究所 血液病医院;
【关键词】： 脐带 间质干细胞 胶原酶类 传代效应 沃顿胶
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 脐带是连于胚胎脐部与胎盘间的索状结构,外被羊膜、内含分化的黏液性结缔组织,结缔组织内除闭锁的卵黄囊和尿囊外,还有脐动脉和脐静脉[1]。脐带中的间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)可来源于沃顿胶、脐血管周围、脐血及脐静脉血管内皮下,人脐带MSC在适当的诱导条件下

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本文编号：1073437