葡萄胎病理相关基因F10编码蛋白单克隆抗体的制备与应用

发布时间：2017-10-23 01:25

  本文关键词：葡萄胎病理相关基因F10编码蛋白单克隆抗体的制备与应用

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【摘要】：目的构建原核质粒表达葡萄胎相关新基因F10重组蛋白,分离纯化制备其单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法用逆转录聚合酶链反应法从成人组织中扩增F10编码序列,将其克隆到p ET28a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达F10基因重组蛋白。以纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。ELISA法检测杂交瘤细胞分泌F10单克隆抗体的效价和类型,免疫组织化学染色检测F10蛋白在葡萄胎及胎盘组织中的表达,鉴定制备F10单克隆抗体的特异性。结果成功构建了p ET28a/F10原核表达质粒并获得高纯度的重组F10蛋白。筛选出3株能稳定分泌抗F10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞系,其效价比高达1∶7.2×105,免疫球蛋白类型均为Ig G1类。免疫组织化学染色显示该抗体能特异结合葡萄胎及胎盘绒毛组织中的F10蛋白,且葡萄胎组织中F10蛋白的表达显著高于正常胎盘组织。结论表达及纯化的重组F10蛋白纯度高,免疫原性强。以此为抗原制备的抗F10蛋白的单克隆抗体效价高、特异性强,可用于F10功能的进一步研究。
【作者单位】： 南方医科大学南方医院妇产科;南方医科大学南方医院康复理疗科;
【关键词】： 新基因F F重组蛋白 葡萄胎 单克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(81170595)
【分类号】：R392
【正文快照】： 在我们前期的研究中,为研究滋养层有节制侵入的分子机理,选择滋养层侵袭性正常的早孕绒毛和滋养层发育异常的完全性葡萄胎组织标本,采用抑制性消减杂交的方法建立了完全性葡萄胎与正常早孕绒毛间的差示c DNA文库,以期筛选出在葡萄胎组织中异常表达的基因,从而进一步揭示滋养层

【参考文献】

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1 周瑾,陈士岭,邢福祺,庞战军,李冰,周问渠,付欣,丁彦青;葡萄胎发病新基因F10与滋养细胞肿瘤侵袭相关性研究[J];第一军医大学学报;2005年02期

2 崔艳国;全松;邢福，

本文编号：1080998