戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达

发布时间：2017-10-23 02:02

  本文关键词：戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达

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【摘要】：目的:将胞内表达载体p AO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株。方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660拼接后插入去磷酸化的p AO815载体,得到分泌型表达重组质粒α-ORF2128-660/p AO815(单拷贝),然后将Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-α-ORF2128-660)插入到去磷酸化的重组质粒α-ORF2128-660/p AO815中,得到2(AOX-α-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝),电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导,SDS-PAGE分析不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果:α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660已克隆入表达载体中,目的蛋白分泌至诱导液上清中,相对分子质量约为59 000,与阴性对照比,单拷贝、2拷贝转化子表达的产物均有生物活性但表达水平无区别。结论:成功改建成分泌型表达载体,构建了多拷贝重组表达质粒,并且成功表达了目的蛋白,为利用改造的p AO815载体表达其他蛋白奠定了基础。
【作者单位】： 兰州生物制品研究所有限责任公司 甘肃省疫苗工程技术研究中心;
【关键词】： 戊型肝炎病毒 重叠PCR 多拷贝表达盒 毕赤酵母 p AO载体 胞内表达载体 分泌型表达载体
【分类号】：R373
【正文快照】： 酵母表达系统以其表达产物类似于天然蛋白、能保持很好的生物学活性、表达条件易于控制、易于工业化生产等优势,作为疫苗研制的载体已被成功应用[1-2]。由于胞内表达产物还需细胞破碎,才能进行SDS-PAGE及下游纯化工作等,步骤较繁琐。外源基因的有效分泌表达,不仅有利于表达产

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本文编号：1081064