参蛇洗剂抗皮炎湿疹模型药效学及其抗炎机制研究

发布时间：2017-10-23 21:14

本文关键词：参蛇洗剂抗皮炎湿疹模型药效学及其抗炎机制研究

【摘要】：皮炎湿疹是临床常见的一组变态反应性皮肤病，主要包括变应性接触性皮炎（allergic contact dermatitis，ACD）、湿疹和特应性皮炎（atopic dermatitis，AD），发病率较高，因其病程迁延且常伴有明显的瘙痒症状而严重影响患者的生活质量。目前针对该组疾病的药物治疗主要集中在系统应用抗组胺类药物和局部使用糖皮质激素等对症治疗，但因其病因及发病机制复杂，治疗过程漫长，且极易反复，加上这类药物长期使用具有潜在的副作用，使疗效肯定且副作用较小的抗皮炎湿疹药物的研发成为临床的迫切需求。中医药对皮炎湿疹的治疗独具优势，能通过多种途径作用，有效祛风利湿、清热润燥，抗过敏，且讲究诸药协同，重视整体平衡，因而疗效好，副作用少。参蛇洗剂由苦参、蛇床子、黄柏、当归、川芎、大黄、冰片等7味药组成，诸药协同组方，可共同发挥抗炎抑菌、祛风润燥、凉血活血之功效。同时，通过皮肤给药，不仅可以避免口服给药的胃肠道刺激，降低全身的血药浓度，减少毒副作用，而且使用方便，提高了患者的顺应性，有望为皮炎湿疹的临床治疗提供一种新的制剂。在研究皮炎湿疹的过程中，人们利用小鼠、大鼠、豚鼠等建立了很多动物模型，这些模型为研究皮炎湿疹的病因病机、药物治疗和新药开发等提供了良好的平台和工具。其中最为经典的是急性期模型——小鼠ACD模型和慢性期模型——小鼠慢性皮炎湿疹模型。本研究通过建立小鼠急慢性皮炎湿疹模型，进行参蛇洗剂的药效学研究，并从影响炎症相关的细胞因子和趋化因子表达的角度对其可能机制进行初步探讨，为将其开发成中药新药提供实验依据。第一部分参蛇洗剂对小鼠ACD模型的药效学研究本实验通过2,4-二硝基氟苯（2,4-Dinitrofluorobenzene，DNFB）腹部致敏和耳部激发BALB/c小鼠建立ACD模型。60只BALB/c小鼠随机平分为6组：空白对照组、模型对照组、高中低三个剂量参蛇洗剂组（1：2，1：1和1：0.5）及阳性药对照组（1%氢化可的松溶液）。以1%DNFB腹部致敏3天后以1%DNFB涂耳部进行激发，激发后12h开始分别涂药治疗。在激发前、激发后12h和激发后48h分别对小鼠耳厚度及耳变应反应程度进行测量评分，计数1min内小鼠搔抓耳部次数，小鼠耳部皮损以HE染色，观察皮肤炎性细胞浸润等病理变化情况。结果显示，不同浓度的参蛇洗剂均能减轻小鼠ACD模型的耳厚度和变应反应评分，缓解小鼠搔抓现象，减轻耳部皮肤炎症程度，总体治疗上各浓度组及1%氢化可的松溶液组没有明显统计学差异，但改善淋巴细胞浸润程度弱于1%氢化可的松溶液，而小鼠搔抓耳部次数明显少于1%氢化可的松溶液组。提示参蛇洗剂对ACD可能具有较好的治疗作用，在1：0.5至1：2浓度之间不呈剂量依赖性，在总体治疗作用上和1%氢化可的松溶液相当，改善淋巴细胞浸润上稍弱于1%氢化可的松溶液，但在抗瘙痒上明显优于1%氢化可的松溶液。第二部分参蛇洗剂对小鼠慢性皮炎湿疹模型的药效学研究本实验通过2,4-二硝基氯苯（2,4-Dinitrochlorobenzene，DNCB）腹部致敏和反复耳部激发BALB/c小鼠建立慢性皮炎湿疹模型。60只BALB/c小鼠随机平分为6组：空白对照组、模型对照组、高中低三个剂量参蛇洗剂组（1：2，1：1和1：0.5）及阳性药对照组（1%氢化可的松溶液）。以7%DNCB100μl腹部致敏5天后以0.5%DNCB20μl涂耳部进行激发，其后每3天激发一次，共4次，首次激发后12h开始分别涂不同药物治疗。在激发前、每次激发后24h和末次激发后第3天分别对小鼠耳厚度及耳变应反应程度进行测量评分，计数1min内小鼠搔抓耳部次数，并以HE染色观察小鼠耳部皮肤炎性细胞浸润等病理变化情况。结果显示，不同浓度的参蛇洗剂均能减轻小鼠慢性皮炎湿疹模型的耳厚度和变应反应评分，显著缓解小鼠搔抓现象，减轻耳部皮肤炎症程度，从临床和病理两方面，，总体治疗上参蛇洗剂在改善耳厚度、变应反应评分及淋巴细胞浸润方面稍逊于1%氢化可的松溶液，但在改善瘙痒方面，则强于1%氢化可的松溶液。提示参蛇洗剂将来或许能运用于临床治疗慢性皮炎湿疹类皮肤病，尤其是在缓解瘙痒方面具有独到的效果。第三部分参蛇洗剂治疗小鼠皮炎湿疹模型的抗炎机制初探在药效学研究基础上，对前两部分采集的血清及耳标本作机制研究。ELISA检测血清中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4及CCL27蛋白水平，realtime PCR检测皮损处上述因子的mRNA水平。结果发现，小鼠ACD和慢性皮炎湿疹建模后，外周血中TNF-α和IFN-γ水平均明显下降，IL-1β和IL-4水平明显增高，呈现典型的Th2型免疫反应；而皮损处TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4和CCL27mRNA表达水平均明显增高，显示出明显的炎症反应。经参蛇洗剂治疗后，ACD小鼠外周血上述中细胞因子水平变化均不明显，慢性皮炎湿疹小鼠仅高浓度参蛇洗剂组外周血IL-4水平降低；而皮损处上述因子的mRNA表达水平均显著下降，各浓度参蛇洗剂组间差异不明显，显示出炎症的减退。免疫组化显示，小鼠ACD和慢性皮炎湿疹建模后，皮损处CCL27蛋白水平明显增高，参蛇洗剂及1%氢化可的松溶液后，皮肤局部CCL27蛋白水平明显降低，以表皮层减少最为明显，与炎症细胞浸润的改善正相关。提示参蛇洗剂可能主要通过影响皮损局部的TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4和CCL27等炎症因子来发挥抗炎作用的，而对血清中相关因子影响相对较小，其具体的作用途径与分子机制有待于进一步研究。
【关键词】：参蛇洗剂 皮炎湿疹 药效学 趋化因子 CCL27
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R275.9
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