LPS长期刺激巨噬细胞引起适应性免疫应答受损

发布时间：2017-10-23 23:23

  本文关键词：LPS长期刺激巨噬细胞引起适应性免疫应答受损

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【摘要】：巨噬细胞是一种多功能的细胞，在不同的环境下可分化成不同的表型。脂多糖（Lippolysaccharide,LPS）通常被公认为一种巨噬细胞的激活剂。本研究分别用LPS短时间(4h)刺激和长时间(48h)刺激人外周血单核细胞来源的巨噬细胞，观察LPS对巨噬细胞表型和功能所变化产生的影响。目的：体外建立巨噬细胞模型，研究LPS作用48h后巨噬细胞表型的改变，阐述表型变化机制。 方法：蔗糖密度梯度离心法从全血中分离人外周血单个核细胞，结合磁珠细胞分选技术把单核细胞分选出来，体外诱导单核细胞分化为巨噬细胞，以未处理或IFN-γ处理为对照，对LPS处理48h的巨噬细胞进行形态学观察，细胞表面分子（HLA-DR/CD14/CCR7/HLA-ABC/CD40）的表达检测，以及细胞因子（IL-10/IL-12/IL-6/TNF-α）分泌水平的检测。同时把巨噬细胞与CD3~+T细胞进行异体共培养实验，进一步观察巨噬细胞对T细胞增殖能力的影响。用荧光定量PCR在RNA水平验证TLR-4信号通路中的非MyD88依赖型途径相关分子的表达水平。 结果：LPS处理48h的巨噬细胞，抗原递呈能力（HLA-DR）下降，免疫抑制细胞因子IL-10升高，把LPS-M与异体T细胞共培养6天，其促进CD8~+T细胞的增殖的能力较弱。定量PCR结果显示LPS-M条件下的TRIF、IRF3、CIITA均呈下调状态。 结论：短时间的LPS刺激可以迅速激活巨噬细胞，，但是LPS处理巨噬细胞48h后，巨噬细胞呈现一种免疫抑制的状态。且刺激CD8~+T细胞增殖的能力减弱。非MyD88依赖型TLR-4信号通路受损。
【关键词】：巨噬细胞 脂多糖 免疫抑制表型 Toll样受体4信号通路
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 前言7-13
• 1.1 研究背景8-13
• 1.1.1 单核吞噬细胞系统（MPS）的分化8
• 1.1.2 TLR-4信号通路8-9
• 1.1.3 M1和M2型巨噬细胞9-10
• 1.1.4 巨噬细胞的可塑性与T淋巴细胞10-11
• 1.1.5 固有免疫与适应性免疫11
• 1.1.6 抗原递呈11-13
• 第二章 技术路线13-14
• 第三章 材料与方法14-25
• 3.1 主要材料14-16
• 3.1.1 细胞和样本14
• 3.1.2 主要试剂14-15
• 3.1.3 主要仪器15-16
• 3.2 实验方法16-25
• 3.2.1 从人的外周血中分离单个核细胞16
• 3.2.2 从单个核细胞中用磁珠分选monocyte（负选）16-17
• 3.2.3 体外诱导单核细胞分化成巨噬细胞17
• 3.2.4 体外诱导单核细胞分化成DC17-18
• 3.2.5 CD3~+T细胞磁珠分选（正选）18
• 3.2.6 CFSE染色18
• 3.2.7 巨噬细胞与异体淋巴细胞共培养实验18-19
• 3.2.8 AnnexinV-FITC细胞凋亡检测19
• 3.2.9 ELISA检测细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-1019-20
• 3.2.10 ELISA检测细胞因子IL-6（减步法）20-21
• 3.2.11 流式检测细胞表面抗体21
• 3.2.12 微量总RNA的提取21
• 3.2.13 总RNA逆转录21-22
• 3.2.14 荧光定量PCR（SYBRGreenAssay）22-24
• 3.2.15 统计学处理24-25
• 第四章 结果25-34
• 4.1 从人外周血中分离得到纯度较高的单核细胞25
• 4.2 LPS刺激巨噬细胞48小时后抗原递呈能力下降25-27
• 4.3 LPS长时间刺激的巨噬细胞无凋亡发生27
• 4.4 LPS刺激巨噬细胞的动态变化27-30
• 4.4.1 不同刺激的时间点下LPS-M的HLA-DR和CCR7动态变化27-28
• 4.4.2 不同刺激的时间点下LPS-M分泌的细胞因子的动态变化28-29
• 4.4.3 排除IL-10自分泌引起HLA-DR的高表达29-30
• 4.5 从人外周血分离得到纯度较高的CD~3S+T细胞30-31
• 4.6 异体混合淋巴细胞共培养31-32
• 4.7 TLR-4信号通路关键调控基因表达受损32-34
• 第五章 讨论与结论34-36
• 第六章 总结36-37
• 第七章 本文的创新之处37-38
• 第八章 展望38-39
• 参考文献39-43
• 附录43-44
• 在学期间发表文章44-45
• 致谢45

【共引文献】

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本文编号：1085908