重组单增李斯特菌溶血素O在HEK293T细胞中的分泌表达及活性分析

发布时间：2017-10-24 18:17

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【摘要】：为研究单增李斯特菌分泌的溶血素O(LLO)的免疫佐剂作用,需要构建其真核表达载体,使其在动物体内进行分泌表达,从而发挥其生物佐剂活性。为此,本试验通过PCR方法从LM基因组DNA中扩增了LLO基因,并将其插入到带有CD5信号肽的质粒pcDNA3.1ACD5sp的信号肽下游构建成真核表达载体,然后转染人胚肾细胞HEK293T细胞使其分泌表达,用Ni-NTA琼脂糖凝胶层析法从培养基中分离纯化重组LLO蛋白,通过Western-blot对其进行鉴定,并用溶血试验鉴定其生物活性。结果表明,扩增的LLO基因序列与GenBank中的基因序列完全一致,在HEK293T细胞中表达的重组LLO在CD5信号肽介导下能被分泌到细胞外,并具有较强的溶血活性,这为进一步研究LLO的功能提供了必要的条件。
【作者单位】： 中国人民解放军保定第252医院检验科;河北大学基础医学院;河北农业大学动物医学院/河北省兽用生物制品工程技术研究中心;
【关键词】： 单增李斯特菌 溶血素O 真核表达 溶血活性
【基金】：河北省自然科学基金(C2013204130) 河北大学医学学科专项资金建设项目(2015A2002)
【分类号】：R378;S852.61
【正文快照】： 单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可引发人的脑膜炎、发热性败血性胃肠炎、孕妇母婴和围产期感染等疾病的发生[1-4],直接威胁着人类和动物的健康。研究表明,在LM的感染过程中其毒力因子李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO)发挥着

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本文编号：1089943