真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型

发布时间：2017-10-25 01:04

  本文关键词：真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型

  更多相关文章： Wntb基因 ft细胞 软骨细胞 转染 细胞退变

【摘要】：目的在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上,转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b至293ft细胞中,48 h后收集细胞上清及转染细胞,Western blot鉴定Wnt7b在293ft细胞中的表达。收集的上清分别稀释10倍和50倍培养大鼠软骨细胞,24 h后观察细胞形态并收集细胞蛋白和抽提RNA,Western blot和定量PCR检测软骨退变指标MMP13、MMP3、Ⅱ型胶原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表达。结果成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP载体上且在293ft细胞中得到有效表达。含Wnt7b培养基干预软骨细胞24 h后,软骨细胞形态由原来的多角形变成长梭形,Wnt7b处理组软骨细胞MMP13和MMP3表达显著上调,Ⅱ型胶原的表达下调。PCR结果表明A-can和Sox9表达下降,ColⅩ和ADAMTS5表达增强。结论有效在真核细胞中表达Wnt7b基因并且促进大鼠软骨细胞退变,建立软骨细胞退变的体外模型。
【作者单位】： 浙江中医药大学附属湖州市中医院;上海吉凯基因化学技术有限公司;上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;上海市中医药研究院骨伤科研究所;
【关键词】： Wntb基因 ft细胞 软骨细胞 转染 细胞退变
【基金】：国家自然科学基金(81073114,81072830) 上海市教委创新项目(11YZ64) 上海市高校青年教师培养资助计划(ZZszy12017)~~
【分类号】：R3416
【正文快照】： 正常的软骨结构是由细胞外基质如Ⅱ型胶原和可聚蛋白聚糖(aggrecan为主)组成。为维持软骨结构完整,基质成份通过基质降解酶如MMP13和ADAMTS5不断进行更新和重塑,基质的降解和合成基质同时进行,从而维持软骨结构的完整[1-4]。当软骨组织中这种合成和降解失衡时,软骨细胞退变和

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 苏友新;林学义;陈秀明;赵富强;陈宝军;郑良朴;;IL-1β对大鼠关节软骨细胞“Wnt/β-catenin”通路的影响[J];福建中医药;2012年06期

2 秦俊;陈廖斌;汪晖;;脱氢表雄酮对白细胞介素-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响[J];武汉大学学报(医学版);2012年03期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 陈晓东;鹿茸多肽对大鼠软骨细胞退变老化的影响[D];福建中医学院;2007年

，

本文编号：1091338