Neuritin对Neuralized与Notch通路配体结合及Notch途径下游靶基因的影响

发布时间：2017-10-25 05:10

  本文关键词：Neuritin对Neuralized与Notch通路配体结合及Notch途径下游靶基因的影响

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【摘要】：目的：探讨Neuritin对细胞中Neuralized与Notch通路的配体结合以及对Notch通路的受体及下游靶基因的影响，明确Neuritin通过Neuralized调节Notch通路的的机制。 方法： （1）探讨Neuritin是否通过对Neuralized的影响调节Notch通路配体Jag1：利用免疫荧光、免疫共沉淀以及Western-Blot技术观察过表达Neuritin以及在RNA干扰下降低Neuralized后Jag1表达水平的变化； （2）探讨不同浓度Neuritin作用下Notch信号通路中Jag1与Neuralized结合量的变化：利用免疫共沉淀及Western-Blot首先确定各质粒转染的最佳浓度以及Jag1与Neuralized结合的最佳时间，从而观察不同浓度Neuritin作用下Notch信号通路中Jag1与Neuralized结合量的变化； （3）探讨Neuritin对细胞中Notch通路受体胞内区（NICD）、下游靶基因HES1蛋白表达水平的影响：利用免疫共沉淀及Western-Blot技术检测在Neuritin作用下Notch信号通路受体胞内区（NICD）、下游靶基因HES1蛋白表达水平的变化。 结果： （4）利用免疫共沉淀以及Western-Blot技术检测Neuritin过表达能增加细胞中Jag1表达水平；利用RNA干扰技术降低Neuralized表达后，，细胞中Jag1的表达水平有明显升高； （5）浓度梯度增加的Neuritin能使Notch配体Jag1表达呈梯度增加，并使Neuralized（酶）与Jag1（底物）的亲和力逐渐降低； （6） Neuritin在降低细胞中Neuralized与Jag1的亲和力的同时，降低了Notch受体胞内区，Notch途径下游靶基因HES1的表达。 结论： （1）Neuritin对Notch信号途径配体Jag1的影响是受Neuralized介导的； （2）Neuritin通过影响Neuralized与Jag1的结合，从而抑制了Neuralized介导的Notch信号途径配体Jag1蛋白的泛素化及内吞； （3）Neuritin能部分下调Notch信号通路受体NICD及其下游靶基因HES1的表达。
【关键词】：Neuritin Neuralized Notch信号通路
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 主要符号、缩略语、术语注释说明表8-9
• 前言9-11
• 技术路线11-12
• 材料12-18
• 方法18-29
• 结果29-43
• 1 Neuritin 对 Notch 信号途径配体 Jag1 的表达水平的影响29-37
• 1.1 需转染质粒测序及鉴定29-33
• 1.2 Neuritin 通过 Neuralized 影响 Notch 信号途径配体 Jag1 表达水平33-34
• 1.3 Neuralized 表达降低 Neuritin 对 Notch 信号途径配体 Jag1 的影响34-37
• 2. Neuritin对Neuralized与Jag1结合的影响37-41
• 2.1 细胞中各质粒转染浓度的确定37-38
• 2.1.1 细胞中Jag1转染浓度的确定37
• 2.1.2 细胞中Neuralize转染浓度的确定37-38
• 2.1.3 细胞中Neuritin转染浓度的确定38
• 2.2 Jag1与Neuralized结合最佳时间点的确定38-39
• 2.3 不同浓度Neuritin 对Neur与Jag1 结合量的影响39-41
• 3 Neuritin 对 Neuralized 介导的 Notch 信号通路受体和下游靶基因的影响41-43
• 讨论43-46
• 结论46-47
• 参考文献47-51
• 综述51-59
• 参考文献55-59
• 致谢59-60
• 作者简介60-61
• 导师评阅表61

【参考文献】

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1 张琦,郑志z

本文编号：1092207