人脐静脉内皮细胞分离培养方法的建立及优化

发布时间：2017-10-25 05:14

  本文关键词：人脐静脉内皮细胞分离培养方法的建立及优化

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【摘要】：为优化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代及传代的培养方法,建立一种简便且能够获得数量较多及活力良好的HUVEC培养体系。分离脐静脉并插管,用0.1%的II型胶原酶灌注消化分离内皮细胞。M199完全培养基悬浮并接种于细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。待细胞铺满80%时,0.25%胰酶-EDTA消化传代培养。倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,姬姆萨染色法鉴定内皮细胞的形态,vWF因子相关抗原免疫荧光法鉴定内皮细胞。比较不同胶原酶消化时间、不同接种密度、不同胰酶消化时间、不同培养基组分对细胞得率、形态和纯度的影响。结果表明,原代培养时,II型胶原酶最佳消化时间为15min,最佳接种密度为1×106 mL-1;传代培养时,胰酶最佳消化时间为2min。倒置显微镜下观察和姬姆萨染色结果显示,贴壁内皮细胞呈长梭形,且呈单层铺路石状排列。免疫荧光检测结果表明,细胞胞浆呈绿色荧光,为vWF因子阳性细胞,DAPI衬染细胞核呈蓝色,显示内皮细胞纯度接近100%。本实验成功建立了HUVEC原代分离培养的优化体系,纯度高、活力好,为后续研究做好了准备。
【作者单位】： 山西农业大学生命科学学院;山西农业大学山西省环境兽医学重点实验室;
【关键词】： 人脐静脉血管内皮细胞 胶原酶消化法 姬姆萨染色 免疫荧光技术
【基金】：国家自然科学基金(31302155,31302158) 山西农业大学博士启动基金(2013YJ39)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 血管内皮细胞(endothelial cells,EC)是一种多功能细胞,其在多种疾病中所起的重要作用已越来越受到重视,已成为当今医学、生物学领域的重要研究对象[1]。人脐静脉(human umbilical vein,HUV)是培养血管内皮细胞的常用来源之一,与动物血管内皮细胞相比,人脐静脉内皮细胞(humanu

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 严凤英;于萍;关林波;彭冰;周淑;;原代人脐静脉内皮细胞分离培养方法的探讨及其鉴定[J];华西医学;2010年04期

2 庞钰莹;岳文斌;于雪静;李鹏飞;孟金柱;刘岩;李晓明;黄洋;任有蛇;吕丽华;;绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养中促卵泡素和胰岛素浓度优化研究[J];山西农业大学学报(自然科学版);2012年06期

3 贾涵婧;王逸群;黄锭;罗剑;周琳婷;陈则;刘旭平;谭文松;周燕;;微载体浓度与细胞接种密度对MDCK细胞生长的影响[J];中国生物制品学杂志;2014年09期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 校娟;原代狒狒股动脉内皮细胞的炎症损伤机制和干预研究[D];山东大学;2013年

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 张程;路苹;晏木云;王中新;张湘燕;解晓元;欧阳章宏;;肺泡灌洗液TNF-α、IL-8和MMP-9在大鼠自身免疫性肺气肿发病中的作用[J];广东医学;2013年07期

2 张朝杰;张程;路苹;欧阳章宏;张湘燕;;甲泼尼龙琥珀酸钠对自身免疫性肺气肿大鼠TNF-a、MMP-9、IL-8及VEGF水平的影响[J];贵州医药;2014年04期

3 于瑞杰;洪骏;汪俊军;;烟酸抗动脉粥样硬化研究进展[J];临床检验杂志;2014年05期

4 张瑛;邹和群;夏学颖;;改良酶消化法体外培养人脐静脉内皮细胞[J];山西医科大学学报;2012年06期

5 戴青原;谭小兵;赵昭;胡家丽;郭涛;;人脐静脉内皮细胞的原代培养和鉴定[J];现代生物医学进展;2013年28期

6 韩婧;张朝杰;张程;路苹;欧阳章宏;张湘燕;;甲泼尼龙琥珀酸钠对自身免疫性肺气肿大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响[J];中国生化药物杂志;2014年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 戴青原;内脏脂肪素对氧化应激HUVECs的作用及其分子机制研究[D];昆明医科大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 宫先卫;川陈皮素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用[D];山东大学;2011年

2 王中新;TNF-α、VEGF和MMP-9在大鼠自身免疫性肺气肿发病中的作用[D];遵义医学院;2013年

3 靳飞鹏;阿昔莫司对高棕榈酸饮食诱导的动脉粥样硬化的影响[D];泸州医学院;2013年

4 李娟娟;利拉鲁肽对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用[D];蚌埠医学院;2014年

5 李晓霞;氧化应激状态下轻度尿酸升高对HUVECs损伤机制的研究[D];昆明医科大学;2014年

6 卢锦华;电针结合有氧运动对慢性缺血性认知障碍模型大鼠ICAM-1及相关因子表达的影响[D];湖南中医药大学;2015年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 高庆华,蒋超祥,韩春梅;FSH和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响[J];中国草食动物;2004年04期

2 何锡忠;李春华;倪建平;蒋风英;邹勇;;微载体培养PK-15细胞试验条件的优化[J];动物医学进展;2010年08期

3 王锋;卵泡生长发育成熟及其内分泌调控[J];国外兽医学.畜禽疾病;1994年01期

4 孙祥明,谭文松,张元兴,华平,周亚竞;接种密度对Vero细胞在微载体表面生长的影响[J];华东理工大学学报;1999年04期

5 秦明春;王若光;秦莉花;刘小丽;李春梅;刘惠萍;叶赞;;人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定[J];湖南中医药大学学报;2007年04期

6 沈武玲;王家敏;于国伟;;微载体培养技术在生物医药领域的应用[J];江苏农业科学;2012年08期

7 龚衍;李尚为;樊伟;;胰岛素促进体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞增殖[J];四川生理科学杂志;2008年02期

8 王佃亮,肖成祖,陈昭烈,黄子才;微载体高密度培养Vero细胞的研究[J];生物工程学报;1996年02期

9 孙晋艳;黄洋;张航;吕丽华;;FSH对体外培养猪卵巢颗粒细胞生长及增殖的影响[J];山西农业科学;2011年05期

10 黄洋;孙晋艳;李鹏飞;靳辉;吕丽华;;绵羊卵泡颗粒细胞体外培养条件的优化[J];山西农业科学;2012年02期

【相似文献】

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1 王京美;;小鼠骨髓细胞染色体G带和C带同显的方法[J];兰州医学院学报;1986年02期

2 杨家华;郭志宏;;抗癌药物6-MP对小白鼠染色质小体的影响和EMX效果[J];青海大学学报(自然科学版);2008年04期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

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本文编号：1092223