单抗制品中CHO细胞宿主蛋白残留双抗夹心ELISA检测方法的建立

发布时间：2017-10-26 14:42

  本文关键词：单抗制品中CHO细胞宿主蛋白残留双抗夹心ELISA检测方法的建立

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【摘要】：目的建立单抗制品中CHO细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)残留双抗夹心ELISA检测方法。方法确定双抗夹心ELISA方法的最佳工作条件,并对该方法的精密度和准确度进行验证,确定线性范围及最低检出限;用建立的方法与市售试剂盒分别检测低、中、高浓度HCP标准品及抗TNF-α单抗原液、抗VEGF单抗纯化工艺样品中的HCP。结果建立的双抗夹心ELISA法最佳抗体包被浓度为1.5μg/ml,酶标抗体浓度为1μg/ml,160 r/min,37℃孵育2.5 h;TMB 37℃孵育15 min;以630 nm为参比波长,450 nm为测定波长。该方法的线性范围为3.125~100 ng/ml,最低检测限为3.125 ng/ml;试验内变异系数(CV)和试验间CV均小于15%,回收率为85.3%~115.1%。与商品化试剂盒检测结果基本一致,可用于检测纯化工艺样品。结论已成功建立单抗制品中CHO细胞HCP残留双抗夹心ELISA检测方法,该方法可代替市售试剂盒用于CHO细胞HCP残留检测,可使检测成本降低30倍。
【作者单位】： 广东东阳光药业有限公司;
【关键词】： CHO细胞 宿主蛋白 双抗夹心酶联免疫吸附法
【基金】：广东省引进创新科研团队计划项目(201101Y0104990178)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： CHO细胞表达系统能够折叠、组装和翻译后修饰产生的活性功能分子[1-2],因此被广泛应用于单克隆抗体和FC-融合蛋白[3]的生产,但CHO细胞中残 留的宿主蛋白(host cell protein,HCP)作为人类自身系统的外源蛋白,具有诱导机体产生免疫反应的潜在可能性[4],当其在人体内水平达到100

【参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：1099106