SPAG6基因RNAi慢病毒载体的构建及其对SKM-1细胞凋亡的影响

发布时间：2017-10-27 22:24

  本文关键词：SPAG6基因RNAi慢病毒载体的构建及其对SKM-1细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的构建SPAG6-shRNA慢病毒载体靶向沉默SPAG6基因,探讨SPAG6基因沉默对人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并构建3条针对SPAG6基因的shRNA质粒表达载体,共转染293T细胞后得到可表达SPAG6基因RNAi的慢病毒载体。转染SKM-1细胞,利用流式细胞术检测转染效率,qRT-PCR及Western blot验证SPAG6基因干扰效果,筛选最佳靶点。CCK-8法检测SPAG6基因沉默对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建SPAG6-shRNA慢病毒载体,流式细胞术检测转染效率均在60%以上。qRT-PCR及Western blot检测结果显示SPAG6-shRNA3慢病毒载体敲除效率最高,为最佳靶点。SPAG6基因干扰后,干扰组SKM-1细胞的增殖明显受抑,抑制率为(60.18±0.37)%,与阴性对照组相比差别有统计学意义(P0.05)。干扰组SKM-1细胞凋亡率为(16.32±5.80)%,显著高于阴性对照组[(4.28±0.88)%,P=0.024]及空白对照组[(3.08±1.50)%,P=0.019]。结论 SPAG6-shRNA慢病毒载体能有效降低SPAG6基因表达水平,抑制SKM-1细胞增殖并促进其凋亡。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院血液内科;
【关键词】： SPAG基因 慢病毒 RNA干扰 骨髓增殖异常综合征
【基金】：重庆市自然科学基金重点项目(CSTC2013jj B0145)~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一组起源于多能造血干/祖细胞的恶性克隆性疾病,以无效造血、难治性血细胞减少及高风险向急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化为特征[1]。目前该病发病机制尚不清楚,治疗上采取与白血病相似的治疗手段,但疗效

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