支原体MALP-2通过诱导人单核细胞产生HO-1负调控COX-2的表达

发布时间：2017-10-27 23:16

  本文关键词：支原体MALP-2通过诱导人单核细胞产生HO-1负调控COX-2的表达

  更多相关文章： 巨噬细胞活性脂肽-2 血红素氧合酶-1 丝裂原活化蛋白激酶 核因子相关因子-2 环氧化酶-2

【摘要】：目的：支原体感染所诱导的过度炎症反应是引起组织损伤的重要因素。在支原体感染的同时，机体免疫系统可能具备相应的自我防御机制以对抗感染所引起的炎症失控。本研究旨在探讨支原体巨噬细胞活化脂肽2（macrophage-activatinglipopeptide-2，MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1产生血红素氧合酶-1（Hemeoxygenase， HO-1），，并探讨其是否参与负调控环氧化酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）的表达。 方法：体外培养THP-1细胞，用不同浓度（0、0.01ng/mL、0.1ng/mL、1.0ng/mL和5.0ng/mL）的MALP-2作用16h，或5.0ng/mL MALP-2作用不同时间（0h、4h、8h、12h、16h、24h），Realtime-PCR和Western blot分别检测HO-1mRNA和蛋白的表达，比色法分析HO-1酶活性改变情况；同时用不同浓度放线菌素D（actinomycin D，ActD，0.1～10μM）和放线菌酮（cycloheximide，CHX，0.1～10μM）预处理THP-1细胞1h，随后加入5.0ng/mL MALP-2刺激16h，Westernblot检测HO-1的表达，以证实HO-1的表达是否通过转录和翻译水平表达；采用30μM SB203580、PD98059和SP600125预处理THP-1细胞30min后加入5.0ng/mL MALP-2共孵育细胞16h，Western blot检测HO-1的蛋白表达情况，以探讨HO-1的表达是否受p38，ERK1/2和JNK的调控；提取MALP-2处理后的核蛋白及胞浆蛋白，Western blot检测转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-relatedfactor2，Nrf2）在细胞核及胞浆中的表达情况，并采用siRNA干扰Nrf2表达，探讨HO-1表达是否受Nrf2调控；同时观察MALP-2处理前后THP-1细胞COX-2表达情况，并采用siRNA干扰HO-1表达后，Western blot检测COX-2蛋白的改变情况，以证实HO-1能否调控MALP-2诱导COX-2的产生。 结果： (1)浓度为0、0.01、0.1、1.0、5.0ng/ml的MALP-2诱导人单核细胞系THP-1细胞HO-1mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性增加。此外，浓度为0、0.01、0.1、1.0、5.0ng/ml的MALP-2诱导的HO-1酶活性分别为（0.424±0.022）nmol/mg/h、（0.563±0.133）nmol/mg/h、（1.058±0.189）nmol/mg/h、（1.121±0.148）nmol/mg/h、（1.299±0.186）nmol/mg/h； (2)30μM MAPKs特异性抑制剂SB203580、PD98059和SP600125预处理THP-1细胞后，加MALP-2处理16h后，与单独MALP-2组比较，HO-1的表达量分别抑制了38%、44%和56%，p0.01，具有统计学意义； (3)5.0ng/mL MALP-2能降低细胞浆内Nrf2的表达水平，同时增加其细胞核内含量；且转染Nrf2siRNA后，HO-1的表达下降了40%； (4) MALP-2能以时间依赖性方式诱导COX-2表达，且转染HO-1siRNA后， COX-2的表达增高了2.6倍。 结论： (1) MALP-2诱导的THP-1细胞HO-1表达与MAPKs和Nrf2途径有关； (2) HO-1可能通过下调COX-2的高表达而发挥对炎症的负调控作用。
【关键词】：巨噬细胞活性脂肽-2 血红素氧合酶-1 丝裂原活化蛋白激酶 核因子相关因子-2 环氧化酶-2
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R375
【目录】：

• 主要英文缩写4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-12
• 实验材料12-14
• 实验方法14-23
• 实验结果23-29
• 讨论29-32
• 结论32-33
• 参考文献33-39
• 综述39-50
• 参考文献46-50
• 读硕期间论文50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 刘伯龄;梁s昵

本文编号：1105607