粉尘螨抗原免疫治疗小鼠结肠癌的初步研究

发布时间：2017-10-28 19:25

  本文关键词：粉尘螨抗原免疫治疗小鼠结肠癌的初步研究

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【摘要】：结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居高不下，全球每年有120万例新增结肠癌患者，目前对结肠癌的治疗仍然以手术、放疗和化疗为主。我们研究发现结肠癌患者中Treg细胞比例较正常人高，而在过敏性疾病患者中Treg细胞比例较正常人低。本研究使用粉尘螨粗蛋白和Der f2重组蛋白用于治疗小鼠结肠癌模型以及对治疗效果进行一系列检测。 方法：首先制备和鉴定粉尘螨粗蛋白和表达纯化Der f2重组蛋白，摸索建立合适的小鼠结肠癌模型；制定免疫治疗方案后进行建模及治疗，监测小鼠肿瘤生长状况；处死小鼠后，对小鼠肿瘤进行称重。用流式细胞的方法检测CD8+T细胞比例及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例；用荧光定量PCR的方法检测Foxp3转录水平；分别用Western-blot印迹杂交和免疫组化检测小鼠肿瘤组织内Foxp3蛋白水平。 结果：摸索和建立了合适的小鼠结肠癌模型；成功制备和鉴定了粉尘螨粗蛋白以及表达纯化的Der f2重组蛋白，并用于小鼠结肠癌模型的治疗；经过治疗后，治疗组小鼠肿瘤生长速度均减缓，其肿瘤重量均低于未治疗组；经流式细胞检测，治疗组小鼠体内CD8+T细胞比例上升，CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例下降，，与未治疗组相比，治疗组小鼠体内Foxp3转录水平均明显减低；Western-blot和免疫组化检测结果显示治疗组小鼠肿瘤中Foxp3蛋白水平均降低。 结论：本实验结果表明粉尘螨粗蛋白和Der f2重组蛋白均能有效治疗小鼠结肠癌模型，但其分子机理有待进一步实验证明。用粉尘螨抗原治疗结肠癌有望成为癌症的免疫治疗新方法。
【关键词】：结肠癌 粉尘螨 Treg细胞 Foxp3
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R735.35;R-332
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 第1章 前言8-17
• 1.1 结肠癌8
• 1.2 调节性 T 细胞8-10
• 1.3 Foxp310
• 1.4 免疫与肿瘤10-11
• 1.5 CD8+T 细胞与肿瘤11-12
• 1.6 癌症的免疫治疗12-14
• 1.7 粉尘螨与过敏性哮喘14
• 1.8 过敏性哮喘中的 Th17/Treg 失衡14-15
• 1.9 本课题研究内容与实验设计思路15-17
• 第2章 粉尘螨抗原的制备以及小鼠结肠癌模型的建立17-31
• 2.1 实验材料17-21
• 2.1.1 实验动物17
• 2.1.2 实验仪器设备17-18
• 2.1.3 主要实验样品、试剂与耗材18-19
• 2.1.4 主要实验试剂配制19-21
• 2.2 实验方法21-24
• 2.2.1 粉尘螨粗蛋白提取21
• 2.2.2 重组粉尘螨 Der f2 蛋白的表达、纯化和复性21-23
• 2.2.3 WT-CT-26 细胞培养与 Balb/c 小鼠结肠癌模型的建立23
• 2.2.4 Balb/c 小鼠结肠癌肿瘤 HE 染色23-24
• 2.3 实验结果24-29
• 2.3.1 粉尘螨粗蛋白提取24-25
• 2.3.2 重组 Der f 2 的表达和纯化25-27
• 2.3.3 Balb/c 小鼠结肠癌模型的建立与肿瘤组织 HE 染色27-29
• 2.4 讨论29-31
• 第3章 粉尘螨抗原免疫治疗小鼠结肠癌模型的初步研究31-52
• 3.1 实验材料31-34
• 3.1.1 实验动物31
• 3.1.2 实验仪器设备31-32
• 3.1.3 主要实验样品、试剂与耗材32-33
• 3.1.4 主要试剂配制33-34
• 3.2 实验方法34-41
• 3.2.1 Bal b/c 小鼠结肠癌模型的建立、分组及免疫治疗34-35
• 3.2.2 流式细胞检测 CD8+ T 细胞和 CD4+CD25+FoxP3+Treg 细胞35-36
• 3.2.3 荧光定量 PCR 检测 Foxp3 转录水平36-38
• 3.2.4 免疫组化检测肿瘤组织 Foxp3 含量38-39
• 3.2.5 Western-blot 印记检测 Foxp3 蛋白水平39-41
• 3.3 实验结果41-49
• 3.3.1 粉尘螨粗蛋白和 Der f2 重组蛋白治疗结肠癌模型效果评价41-43
• 3.3.2 流式细胞检测 CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞和 CD8+ T 细胞43-45
• 3.3.3 荧光定量 RT-PCR 检测 Foxp3 转录水平45-46
• 3.3.4 免疫组化检测肿瘤组织 Foxp3 水平46-48
• 3.3.5 Western-blot 印记检测 Foxp3 蛋白水平48-49
• 3.4 讨论49-52
• 第4章 结论与展望52-53
• 4.1 结论52
• 4.2 进一步研究方向52-53
• 致谢53-54
• 参考文献54-59
• 攻读学位期间的研究成果59-60
• 综述60-64
• 参考文献63-64

【参考文献】

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1 马佳佳;Nick Lu;陈必良;;转录因子RORγt对妊娠期哮喘模型小鼠Th17/Treg平衡的调节作用[J];解放军医学杂志;2012年06期

本文编号：1109637